兩面針藥材對腫瘤細胞NCI-H460和SK-OV-3“譜-效”關系的研究.pdf

1、目的：以蕓香科植物兩面針(Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.)為研究對象，以NCI-H460、SK-OV-3兩種腫瘤細胞為藥效模型，構(gòu)建兩面針的指紋圖譜。在兩面針的HPLC指紋圖譜和其抗腫瘤活性的基礎上，通過數(shù)據(jù)處理，找到兩面針“化學譜-藥效”之間的對應關系。
　　 方法：
　　 1.兩面針藥材抗腫瘤活性部位的篩選：兩面針藥材成分復雜，分別甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、石油醚5種不同極性的溶劑對兩面

2、針藥材進行提取，得到不同溶劑部位提取物；采用MTT法，以人大細胞肺癌細胞NCI-H460和人卵巢癌細胞SK-OV-3為模型，對不同極性提取物進行活性篩選，確定兩面針抗腫瘤的活性部位。
　　 2.兩面針藥材抗腫瘤活性的測定：采用MTT法對43個產(chǎn)地的兩面針藥材氯仿提取物進行NCI-H460和SK-OV-3兩種腫瘤細胞的增殖抑制檢測，用酶標儀測得OD值，再計算抑制率。
　　 3.建立兩面針藥材的HPLC指紋圖譜：根據(jù)化學指紋

3、圖譜研究的要求，運用國家藥典委員會頒布的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)軟件，建立并評價兩面針藥材抗腫瘤活性部位的HPLC指紋圖譜。
　　 4.構(gòu)建兩面針藥材譜-效關系模型：采用后退法，將兩面針藥材HPLC指紋圖譜中峰面積進行量化，與MTT法測得兩面針藥材抗腫瘤活性的結(jié)果結(jié)合，構(gòu)建兩面針藥材抗腫瘤“化學譜-藥效”關系。
　　 結(jié)果：
　　 1.兩面針藥材抗腫瘤活性部位的篩選：兩面針抗腫瘤活性的有效成分主要存在于氯仿

4、部位，該部位含有氯化兩面針堿、鵝掌楸堿等多種生物堿成分。
　　 2.兩面針藥材提取物具有明顯的體外抗腫瘤作用，對肺癌細胞和卵巢癌細胞有明顯的增殖抑制作用。
　　 3.建立兩面針藥材的HPLC指紋圖譜：經(jīng)相似度、精密度、重復性及穩(wěn)定性等方法檢測，所建立的兩面針藥材HPLC指紋能全面的反應兩面針藥材氯仿部位主要成分的分布特征。
　　 4.統(tǒng)計結(jié)果表明，HPLC指紋圖譜種的24個指紋峰中，有15個峰對腫瘤細胞NCI-H

5、460有作用，其譜-效關系為：Y=32.703-12.216X2-8.102X4+13.553X5+15.953X6-3.802X8+10.979X9-9.449X11+10.503X14-6.900X15-3.519X16+11.878X17+14.683X18-8.121X21-8.482X22+4.737X23(R2=0.923)；有15個峰對腫瘤細胞SK-OV-3有作用，其譜-效關系為：Y=74.908+18.784X4-10.

6、686X5+10.615X6+2.889X8-5.170X10-7.046X11-7.498X12+4.217X13-8.057X15-9.265X18-15.088X20-4.015X22+3.356X7+5.175X16-2.424X24(R2=0.938)。10批藥材的驗證表明所得的譜-效關系計算值與實際值十分接近。
　　 結(jié)論：兩面針的SK-OV-3細胞和NCI-H460細胞抗腫瘤譜-效方程具有統(tǒng)計學意義。通過方程可以估