兩面針、白花丹抗腫瘤活性物質(zhì)及其金屬配合物的抗腫瘤作用初步研究.pdf

1、目的:檢測(cè)40種化合物的體外抗腫瘤活性，篩選出體外對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用的化合物；研究篩選出的對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用的化合物體外對(duì)小鼠原代肝細(xì)胞的影響，建立本實(shí)驗(yàn)室體外評(píng)價(jià)藥物肝毒性的方法；將篩選出的對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用，肝毒性低的化合物進(jìn)行體內(nèi)藥效學(xué)和毒理學(xué)的初步研究； 方法:(1)采用MTT法測(cè)定40種化合物對(duì)7株腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性，篩選出體外對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用的化合物并計(jì)算出各化合物對(duì)各腫瘤細(xì)胞的IC<,50>值。(2)兩步

2、灌流法分離提取小鼠原代肝細(xì)胞，觀察原代肝細(xì)胞生長(zhǎng)全過程并檢測(cè)培養(yǎng)上清中的ALT、ALB、LDH、BUN的變化情況，確定最佳實(shí)驗(yàn)時(shí)間和實(shí)驗(yàn)方案；通過MTT法檢測(cè)各種化合物對(duì)原代培養(yǎng)肝細(xì)胞的半數(shù)抑制率IC<,50>值并測(cè)定肝細(xì)胞活性指標(biāo)了解各化合物對(duì)肝細(xì)胞的影響；建立本實(shí)驗(yàn)室體外評(píng)價(jià)藥物肝毒性的方法；(3)對(duì)篩選出體外對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用、肝毒性低的化合物進(jìn)行體內(nèi)急性毒理學(xué)試驗(yàn)，得出化合物的LD<,50>值；建立荷瘤小鼠S180模型，腹腔注

3、射化合物N-17觀察體內(nèi)抑瘤效果及對(duì)主要臟器的影響，肝組織勻漿測(cè)定SOD、MDA、NO、GSH-PX的含量；瘤組織做病理組織學(xué)檢查。 結(jié)果:(1)40種化合物中篩選出10種對(duì)7株腫瘤細(xì)胞均有較好的細(xì)胞毒性，并計(jì)算得到每種化合物對(duì)7株腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制率IC<,50>值；(2)通過兩步灌流法分離提取的原代肝細(xì)胞24h貼壁，2到5天生長(zhǎng)良好，ALT、LDH維持平穩(wěn)水平，ALB、BUN處于活性高峰，5天后肝細(xì)胞脫落死亡迅速，各項(xiàng)肝活性

4、指標(biāo)也有相應(yīng)改變，從而確定采用原代肝細(xì)胞進(jìn)行肝毒性實(shí)驗(yàn)的最佳時(shí)間為2-5天；參考10種初篩得到的化合物對(duì)原代肝細(xì)胞半數(shù)抑制率IC<,50>值和對(duì)原代肝細(xì)胞各種活性指標(biāo)的影響，得到N-1、N-3、N-17 3種化合物對(duì)原代肝細(xì)胞的IC<,50>值較高，對(duì)肝細(xì)胞各種活性指標(biāo)影響不大，有進(jìn)行更深入研究的價(jià)值；(3)化合物N-17對(duì)S180肉瘤小鼠有抑制作用，并呈現(xiàn)出劑量依賴關(guān)系。N-17在10mg/kg對(duì)S180肉瘤小鼠的抑瘤率為42.9％，

5、在2.5-10mg／kg的劑量范圍，N-17對(duì)S180肉瘤小鼠的抑瘤率分別為1.95-42.9％，呈劑量依賴關(guān)系。S180小鼠各劑量組對(duì)肝臟、脾臟影響不大。S180小鼠高劑量組對(duì)胸腺有抑制作用，在2.5-10mg/kg的劑量范圍，N-17對(duì)S180肉瘤小鼠的胸腺抑制率分別為5.69-18.51％，呈劑量依賴關(guān)系；N-17能明顯提高S180肉瘤小鼠SOD活性，降低MDA含量，增加GSH-PX活性，降低了NO的含量；瘤組織病理切片可見各劑量

6、組有不同程度的瘤細(xì)胞壞死，其中高劑量組瘤細(xì)胞大片壞死。 結(jié)論:40種化合物中篩選出10種對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用的化合物。建立毒性篩選模型，從10種化合物中篩選出N-1、N-3、N-17 3種化合物對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用，肝毒性低。體內(nèi)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)N-17對(duì)昆明種小鼠S180肉瘤腫瘤模型有明顯的抑制作用，且呈劑量依賴關(guān)系，有免疫毒性。N-17抗腫瘤活性與其直接對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用有關(guān)，同時(shí)N-17能夠增強(qiáng)抗氧化酶的活力，增強(qiáng)機(jī)體的抗