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1、中藥的內(nèi)在品質(zhì)直接關(guān)系到臨床的療效和安全,常規(guī)的以單一或某幾個(gè)成分來控制中藥的質(zhì)量明顯達(dá)不到控制中藥品質(zhì)的目的。2000年,國家頒布的《中藥注射劑指紋圖譜研究技術(shù)要求(暫行)》的通知后,指紋圖譜已成為當(dāng)前中藥質(zhì)量研究和控制的一個(gè)熱點(diǎn)。然而,我們也應(yīng)清醒的認(rèn)識(shí)到:目前的指紋圖譜僅僅局限在“化學(xué)成分群”的分析,所得圖譜并不能如實(shí)體現(xiàn)中藥的內(nèi)在品質(zhì)和療效。如何將指紋圖譜中的“化學(xué)成分群”與中藥的藥效相對(duì)應(yīng),即“譜-效”的高度對(duì)應(yīng)或關(guān)聯(lián),這正是
2、本論文所要研究和解決的問題。
本論文以蕓香科植物兩面針Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.為研究對(duì)象,以7901、7404兩種腫瘤細(xì)胞為藥效模型,構(gòu)建兩面針的HPLC指紋圖譜。在抗腫瘤活性篩選的結(jié)果和化學(xué)成分指紋圖譜的建立基礎(chǔ)上,采用后退法,尋找兩面針“譜-效”之間的對(duì)應(yīng)關(guān)系。本論文的研究包括:方法:(1)兩面針抗腫瘤活性部位的篩選及測(cè)定采用回流法,分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水等4種溶劑對(duì)兩面針?biāo)?/p>
3、材進(jìn)行提取,得到不同溶劑部位提取物;采用MTT法,以人胃腺癌細(xì)胞7901和人肝癌細(xì)胞BEL-7404為模型,對(duì)不同溶劑部位提取物進(jìn)行活性成分篩選,確定兩面針?biāo)幉闹锌鼓[瘤的活性部位。對(duì)43個(gè)產(chǎn)地的兩面針?biāo)幉臉悠愤M(jìn)行抗腫瘤活性的測(cè)定,得到各樣品對(duì)7901和7404腫瘤細(xì)胞的抑制率。
(2)建立兩面針HPLC化學(xué)指紋圖譜根據(jù)化學(xué)指紋圖譜研究的要求,運(yùn)用國家藥典委員會(huì)頒布的中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件,建立并評(píng)價(jià)兩面針抗腫瘤
4、活性部位的HPLC指紋圖譜。
(3)構(gòu)建兩面針譜-效關(guān)系模型將兩面針?biāo)幉腍PLC指紋圖譜中峰面積進(jìn)行量化,與MTT法測(cè)得兩面針?biāo)幉目鼓[瘤活性的結(jié)果結(jié)合,采用后退法構(gòu)建兩面針抗腫瘤“譜-效”關(guān)系。
(4)用HPLC法對(duì)樣品中左旋芝麻素、氯化兩面針堿、乙氧基白屈菜紅堿的含量進(jìn)行測(cè)定,并結(jié)合這三種化學(xué)物質(zhì)標(biāo)品的濃度對(duì)7901和7404細(xì)胞的增殖抑制作用之間的關(guān)系,推測(cè)樣品中這三種化學(xué)物質(zhì)的藥效,說明兩面針?biāo)幉闹懈鞒?/p>
5、分之間的相互作用。
(5)用聚類分析的方法,分別對(duì)5個(gè)產(chǎn)地的兩面針的根、莖及其偽品進(jìn)行鑒別。
結(jié)果:(1)氯仿提取部位為兩面針?biāo)幉目鼓[瘤的活性部位,該部位含有氯化兩面針堿、乙氧基白屈菜紅堿等生物堿類成分。樣品的抗腫瘤活性由高到低排列為:廣西那坡縣>廣西融水縣>廣西大塘鎮(zhèn)>廣西武鳴縣>玉林藥材市場(chǎng)。
(2)建立的兩面針?biāo)幉腍PLC指紋圖譜,其中的24個(gè)指紋峰包括已知具有抗腫瘤活性的氯化兩面針堿、乙
6、氧基白屈菜紅堿等成分。所建立的HPLC指紋圖譜也能很好的區(qū)分兩面針與其非藥用部位、偽品等,這有利于進(jìn)一步規(guī)范兩面針?biāo)幉牡馁|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。
(3)后退法表明:HPLC指紋圖譜中的24個(gè)指紋峰中,有16個(gè)峰對(duì)7404腫瘤細(xì)胞有作用,7404的譜-效關(guān)系式為:Y=61.694+9.154X1-12.423X2-4.137X4+9.241X6-14.578X7-2.129X10-9.759X12-4.819X13-11.475X15+5
7、.356X16+4.041X18-6.399X19+4.209X20+16.245X22-1.757X23+9.155X24(R2=0.923);有14個(gè)峰對(duì)7901腫瘤細(xì)胞有作用,7901的譜-效關(guān)系式為:Y=79.153-8.503X1+6.79X5+4.529X6-5.108X7+5.231X10-8.32X11-9.404X12-23.646X15+9.853X16+5.008X17-6.819X20+3.987X21+3.93
8、5X22-3.006X23(R2=0.913)。10批藥材的驗(yàn)證表明所得的譜-效關(guān)系式計(jì)算值與實(shí)際值十分接近。
(4)兩面針單一成分的藥效小于總藥效;左旋芝麻素、氯化兩面針堿、乙氧基白屈菜紅堿的藥效之和大于總藥效。
(5)兩面針的根,莖以及偽品,用聚類分析的方法能明顯區(qū)分開來。
結(jié)論:(1)由于兩面針?biāo)幉暮袕?fù)雜的化學(xué)成分,直接影響到了其藥效的差異。因此,不能用單一或某幾個(gè)化學(xué)成分對(duì)兩面針?biāo)幉牡?/p>
9、質(zhì)量進(jìn)行控制。
(2)通過對(duì)藥效部位的HPLC指紋圖譜分析,不僅較好的體現(xiàn)出兩面針中左旋芝麻素、氯化兩面針堿、乙氧基白屈菜紅堿等活性成分,也可以進(jìn)行藥材真?zhèn)蔚蔫b別,達(dá)到了對(duì)兩面針?biāo)幉钠焚|(zhì)和療效控制的目的。
(3)本研究所建立的譜-效關(guān)系式很好的反映出兩面針?biāo)幉牡膬?nèi)在品質(zhì),能指導(dǎo)臨床的用藥安全和有效性。
(4)兩面針?biāo)母骰瘜W(xué)成分之間,具有相互協(xié)同和抑制作用,所反映出來的藥效是各成分綜合作用的結(jié)
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