新型硫化氫供體和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶熒光探針的研究.pdf

1、硫化氫(H2S)是生物體內(nèi)重要的氣體信號(hào)分子，參與多種病理生理過(guò)程。維持生物體內(nèi)硫化氫濃度平衡至關(guān)重要，硫化氫供體是提供外源性硫化氫的重要工具。γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)是生物體內(nèi)重要的水解酶，催化谷氨?；鶑墓入赘孰幕蛘吆泄劝滨；衔镛D(zhuǎn)移到受體分子，其異常表達(dá)與腫瘤、糖尿病等疾病狀態(tài)有關(guān)。對(duì)GGT進(jìn)行選擇性、高靈敏、實(shí)時(shí)、可視化檢測(cè)，對(duì)于疾病診斷和病理生理研究具有重要意義。
　　本論文主要開(kāi)展了以下工作:
　　1.以鄰硝

2、基芐硫醇，4-羥甲基-7-甲氧基香豆素和乙酰丙酸為原料設(shè)計(jì)合成了一種新型光活化硫化氫供體，并通過(guò)1H NMR，13C NMR和MS對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。該硫化氫供體自身熒光微弱，在經(jīng)過(guò)365nm強(qiáng)光照射后，快速釋放出硫化氫，同時(shí)釋放熒光物質(zhì)（7-甲氧基香豆素）乙酰丙酸甲酯。采用亞甲基藍(lán)法對(duì)光照釋放的硫化氫進(jìn)行檢測(cè)，并用色譜法對(duì)光裂解所釋放的（7-甲氧基香豆素）乙酰丙酸甲酯進(jìn)行了分析檢測(cè)。在365nm光照3-9min時(shí)間檢范圍內(nèi)，該硫化氫供

3、體的熒光強(qiáng)度與釋放的硫化氫量呈動(dòng)態(tài)學(xué)相關(guān)性。通過(guò)監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度的變化，可間接監(jiān)測(cè)硫化氫的釋放過(guò)程。
　　2.以4-氯-7-硝基苯并呋咱和谷胱甘肽為原料設(shè)計(jì)合成了一種新的GGT熒光探針，并用MS對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。此探針在475 nm激發(fā)光激發(fā)下，發(fā)出微弱熒光;經(jīng)GGT作用后，相同的激發(fā)波長(zhǎng)下，探針溶液發(fā)出明亮的綠色熒光，最大發(fā)射波長(zhǎng)為538nm。通過(guò)紫外光譜實(shí)驗(yàn)，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)工作，推測(cè)探針對(duì)酶的響應(yīng)機(jī)理為酶切谷氨酰胺鍵之后自發(fā)進(jìn)行S