醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠血腦脊液屏障損傷的比較研究.pdf

1、目的：本研究旨在探討比較醋酸鉛與納米硫化鉛暴露后對大鼠血腦脊液屏障的物理屏障功能和免疫監(jiān)視功能的損傷的不同，為不同類型的鉛中毒防治提供理論依據(jù)。
　　方法： SPF級SD雄性大鼠81只隨機分為對照組、醋酸鉛組（20mg/kg）和納米硫化鉛（nano-pbS）組（20mg/kg），每組27只。染毒方法為灌胃，染毒時間為9周。應(yīng)用Morris水迷宮檢測大鼠的學習與記憶功能；運用ELISA法檢測實驗大鼠血清以及腦脊液中白蛋白、白細胞介素

2、-4（IL-4）、干擾素-γ（IFN-γ）、CXCL10含量，并計算出腦脊液白蛋白指數(shù)；激光共聚焦熒光免疫方法檢測脈絡(luò)叢胞質(zhì)附著蛋白-1（ZO-1）、閉合蛋白（Occludin）、血管內(nèi)皮表達粘附分子（ICAM-1）熒光表達分布；采用real-time PCR方法檢測實驗大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1、Occludin、IL-4、IFN-γ、CXCL10和ICAM-1的mRNA的表達；流式細胞術(shù)檢測實驗大鼠全血和腦脊液中CD4+T淋巴細胞的數(shù)量；

3、應(yīng)用透射電鏡對實驗大鼠的脈絡(luò)叢組織上皮細胞的超微結(jié)構(gòu)進行觀察。
　　結(jié)果：1實驗大鼠的生長發(fā)育情況：在醋酸鉛與納米硫化鉛染毒期間，所有實驗大鼠體重未見明顯差異。2醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠學習記憶功能的影響：與對照組比較，醋酸鉛與納米硫化鉛染毒后，第四天，兩染毒組大鼠的逃逸潛伏期均延長，納米硫化鉛組比醋酸鉛組延長32.89％（P<0.05），兩個染毒組大鼠穿越平臺的次數(shù)均有所下降（P<0.05），組間比較無顯著差異。3醋酸鉛與納

4、米硫化鉛暴露對大鼠血清及腦脊液中白蛋白、IL-4、IFN-γ、CXCL10含量的影響：醋酸鉛組和納米硫化鉛組而腦脊液中白蛋白含量較對照組分別升高25.18%和47.70%，納米硫化鉛組比醋酸鉛組升高17.98%（P<0.05），兩組腦脊液白蛋白指數(shù)均較對照組升高，且納米硫化鉛組升高更明顯（P<0.05）；與對照組比較，醋酸鉛組與納米硫化鉛組細胞因子IL-4、IFN-γ的含量增加，CXCL10含量降低。其中，醋酸鉛組與納米硫化鉛組血清中細

5、胞因子 IL-4、IFN-γ含量較對照組分別升高[72.13%、93.56%]和[54.61%、43.50%]，CXCL10含量分別降低了43.11%和53.44%（P<0.05）,但納米鉛組與醋酸鉛組比較無明顯不同。腦脊液中，醋酸鉛組與納米硫化鉛組細胞因子IL-4、IFN-γ和CXCL10與血清中變化趨勢相同。其中，納米硫化鉛組腦脊液中IL-4比醋酸鉛組低13.60%, IFN-γ含量比醋酸鉛組升高205.06%（P<0.05）。4醋

6、酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1、Occludin、ICAM-1和CD4+T淋巴細胞分布的影響：對照組大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1呈連續(xù)線狀環(huán)形分布，熒光較強。醋酸鉛組、納米硫化鉛組大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1熒光減弱，分布呈不連續(xù)性，納米硫化鉛組較醋酸鉛組更為顯著；醋酸鉛組、納米硫化鉛組大鼠脈絡(luò)叢緊密連接蛋白Occludin邊緣熒光與對照組比較減弱。納米硫化鉛組比醋酸鉛組表達下降幅度大；對照組中， ICAM-1的熒光呈不連續(xù)性，醋酸鉛與納米

7、硫化鉛組脈絡(luò)叢中ICAM-1的熒光強度均較對照組增強，納米硫化鉛組更明顯。5醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠脈絡(luò)叢中ZO-1、Occludin、IL-4、IFN-γ、CXCL10和ICAM-1的mRNA的表達的影響：與對照組比較，醋酸鉛組與納米硫化鉛組緊密連接蛋白ZO-1、Occludin mRNA相對表達量均呈下降趨勢（P<0.05），納米硫化鉛組緊密連接蛋白ZO-1、Occludin mRNA相對表達量比醋酸鉛組分別下降了59.37%，

8、11.90%（P<0.05）；與對照組比較，醋酸鉛與納米硫化鉛暴露后，脈絡(luò)叢中ICAM-1、IL-4、IFN-γ的mRNA的表達結(jié)果升高，醋酸鉛與納米硫化鉛組CXCL10蛋白的 mRNA的表達結(jié)果較對照組降低，納米硫化鉛組的ICAM-1、IL-4和CXCL10的mRNA的表達分別比醋酸鉛組高31.19%、72.57%和42.86%， IFN-γ mRNA的表達比醋酸鉛組降低21.63%（P<0.05）。6醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠血液

9、及腦脊液中CD4+T淋巴細胞數(shù)量的影響流：醋酸鉛組大鼠全血中CD4+T淋巴細胞以及醋酸鉛組與納米硫化鉛組腦脊液中CD4+T淋巴細胞比例均較對照組增加（P<0.05）。7醋酸鉛與納米硫化鉛暴露對大鼠脈絡(luò)叢超微結(jié)構(gòu)的影響：觀察發(fā)現(xiàn)對照組脈絡(luò)叢組織微絨毛濃密，排列緊密；線粒體形態(tài)正常；細胞之間的緊密連接結(jié)構(gòu)呈完整性，清晰可見。而醋酸鉛組與納米硫化鉛染毒組脈絡(luò)叢組織微絨毛缺失稀少，排列雜亂無序；線粒體呈腫大及空泡樣改變，且納米硫化鉛組線粒體形態(tài)