左氧氟沙星在大鼠血-腦脊液屏障中轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)理研究.pdf

1、細(xì)菌性腦膜炎是神經(jīng)科常見(jiàn)的疾病，其中肺炎鏈球菌是導(dǎo)致細(xì)菌性腦膜炎常見(jiàn)的致病菌。臨床上常用左氧氟沙星來(lái)治療肺炎鏈球菌腦膜炎，但近年研究顯示肺炎鏈球菌對(duì)左氧氟沙星的耐藥率逐年上升，從而限制了其廣泛應(yīng)用[1,2]。美國(guó)在2007年社區(qū)獲得性肺炎診治指南指出，應(yīng)用左氧氟沙星治療肺炎鏈球菌肺炎時(shí)，應(yīng)使血藥濃度盡可能長(zhǎng)的保持在防耐藥突變濃度(MPC)上，以確保治療的成功及減少耐藥突變體的出現(xiàn)[3]。而血-腦脊液屏障上存在多種藥物外排轉(zhuǎn)運(yùn)體，包括三磷

2、酸腺苷結(jié)合盒(ABC)超家族成員如P糖蛋白，多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)、乳腺癌耐藥蛋白（BCRP，breast cancer resistance protein）等，這些轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在生理?xiàng)l件下對(duì)藥物起到外排作用，將藥物外排到血-腦脊液屏障以外。既往實(shí)驗(yàn)證實(shí)氟喹諾酮類藥物如環(huán)丙沙星、諾氟沙星是外排性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白BCRP的作用底物[4,5]，因此我們猜測(cè)BCRP的存在可能是限制左氧氟沙星通過(guò)血-腦脊液屏障的相關(guān)機(jī)制之一。本實(shí)驗(yàn)擬建立肺炎鏈球菌腦

3、膜炎模型，給予BCRP抑制劑泮托拉唑來(lái)觀察生理及病理情況下對(duì)左氧氟沙星血-腦脊液屏障透過(guò)率的影響，探討B(tài)CRP抑制劑的臨床價(jià)值，為肺炎鏈球菌腦膜炎的治療提供新的方向。
　　目的:
　　1.建立SD(Sprague-Dawley)大鼠肺炎鏈球菌腦膜炎模型;
　　2.研究生理狀態(tài)下左氧氟沙星血-腦脊液屏障的透過(guò)率及BCRP對(duì)左氧氟沙星透過(guò)血-腦脊液屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)功能研究;
　　3.研究肺炎鏈球菌腦膜炎狀態(tài)下左氧氟沙星血-

4、腦脊液屏障的透過(guò)率及BCRP對(duì)左氧氟沙星透過(guò)血-腦脊液屏障的轉(zhuǎn)運(yùn)功能研究;
　　4.比較生理與肺炎鏈球菌腦膜炎狀態(tài)下血-腦脊液屏障透過(guò)率的變化，及應(yīng)用BCRP受體抑制劑后對(duì)左氧氟沙星生理與肺炎鏈球菌腦膜炎狀態(tài)下血-腦脊液屏障透過(guò)率的變化。
　　方法:
　　1.健康雄性SD大鼠18只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、低劑量組、高劑量組，按不同組別分別給予小腦延髓池注射75ul生理鹽水、1.5×107CFU/ml肺炎鏈球菌菌懸液、1.

5、5×108CFU/ml肺炎鏈球菌菌懸液，感染24小時(shí)后取腦組織行HE染色。
　　2.取52只雄性SD大鼠，隨機(jī)分成空白對(duì)照組（2只）、左氧氟沙星(Levo)組（25只）和左氧氟沙星+泮托拉唑(Levo+Panto)組（25只），左氧氟沙星(Levo)組給予單次尾靜脈注射左氧氟沙星(42mg/kg)，左氧氟沙星+泮托拉唑(Levo+Panto)組在給予左氧氟沙星5min前經(jīng)尾靜脈給予泮托拉唑注射液(40mg/kg)后，每組分別于用藥

6、后5min、10min、20min、40min、60min同時(shí)抽取血清、腦脊液，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)重復(fù)做5只大鼠，各標(biāo)本經(jīng)過(guò)預(yù)處理后，采用高效液相色譜儀測(cè)定血清及腦脊液中左氧氟沙星的藥物濃度，用藥物代謝動(dòng)力學(xué)軟件WinNonlin程序處理藥時(shí)數(shù)據(jù)，計(jì)算藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)。
　　3.按方法1制作大鼠肺炎鏈球菌腦膜炎模型，取其中模型成功大鼠50只，隨機(jī)分成空白對(duì)照組（2只），腦膜炎左氧氟沙星(Path+Levo)組（25只）、腦膜炎左氧氟沙星

7、+泮托拉唑(Path+Levo+Panto)組（25只），腦膜炎左氧氟沙星(Path+Levo)組給予單次尾靜脈注射左氧氟沙星(42mg/kg)，腦膜炎左氧氟沙星+泮托拉唑(Path+Levo+Panto)組在給予左氧氟沙星5min前經(jīng)尾靜脈給予泮托拉唑注射液(40mg/kg)后，余方法同方法2。
　　結(jié)果:
　　1.造模過(guò)程中，低劑量組大鼠(1.5×107CFU/ml)造模成功率為83.3％，高劑量組大鼠(1.5×108C

8、FU/ml)造模成功率為33.3％，以低劑量的肺炎鏈球菌菌液成功制造腦膜炎模型大鼠50只。
　　2.在生理情況下，尾靜脈注射左氧氟沙星后，Levo組血藥濃度在12±4.47min達(dá)峰，而腦脊液中藥物濃度于18±4.47min達(dá)峰，Levo+Panto組血藥濃度在14±5.48min達(dá)峰，腦脊液中藥物濃度于18±4.47min達(dá)峰濃度，此后藥物濃度隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低。比較Levo組和Levo+Panto組左氧氟沙星的血漿藥物濃度峰

9、值，Levo+Panto組藥物血漿峰值濃度稍大于Levo組，但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示兩者之間無(wú)顯著性差異(t=0.322，p=0.756)，且兩組血漿藥時(shí)濃度下面積無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=0.903，p=0.315)。Levo+Panto組腦脊液中的藥物峰值濃度高于Levo組的藥物濃度，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=2.640，p=0.025)，且兩組腦脊液藥時(shí)濃度下面積有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=4.342，p=0.003)。Levo+Panto組60min內(nèi)血-腦脊

10、液屏障透過(guò)率為0.378±0.01，高于Levo組0.303±0.03，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=2.801，p=0.024)。
　　3.在肺炎鏈球菌腦膜炎狀態(tài)下，尾靜脈注射左氧氟沙星后，Path+Levo組血藥濃度在12±4.47min達(dá)峰，而腦脊液中藥物濃度于18±4.47min達(dá)峰，Path+Levo+Panto組血藥濃度在11±5.48min達(dá)峰，腦脊液中藥物濃度于15±7.07min達(dá)峰濃度，此后兩組藥物濃度均隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐

11、漸降低。比較Path+Levo組和Path+Levo+Panto組藥物在血漿的峰值濃度，Path+Levo+Panto組血漿藥物濃度稍大于Path+Levo組，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示兩者之間無(wú)顯著性差異(t=0.742，p=0.403)，且兩組血漿藥時(shí)濃度曲線下面積無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=0.703，p=0.515)。Path+Levo+Panto組腦脊液中的藥物峰值濃度高于Path+Levo組的藥物濃度，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析提示兩者之間有顯著性差異(t=3.

12、551，P=0.007)。Path+Levo組60min內(nèi)血-腦脊液屏障透過(guò)率為0.638±0.07。 Path+Levo+Panto組60min內(nèi)血-腦脊液屏障透過(guò)率為0.786±0.059，兩組血-腦脊液屏障透過(guò)率統(tǒng)計(jì)學(xué)有差異(t=4.728，p=0.001)。
　　4.與Levo組(0.303±0.03)相比較，Path+Levo組左氧氟沙星血-腦脊液屏障透過(guò)率明顯升高（0.638±0.07），兩者有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t=8.87

13、6，p＜0.0001);與Levo+Panto組(0.378±0.0l)相比，Path+Levo+Panto組（0.786±0.059）左氧氟沙星血-腦脊液屏障的透過(guò)率明顯升高，兩者相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=14.82，p＜0.0001)。
　　結(jié)論:
　　1.成功建立了肺炎鏈球菌腦膜炎大鼠模型，經(jīng)枕大孔穿刺法可以成功用于獲取大鼠腦脊液標(biāo)本，簡(jiǎn)單易行，損傷小，成功率高。
　　2.生理狀態(tài)下給予BCRP阻斷劑后可以提高左氧氟