乙醇在HBV DNA轉(zhuǎn)染中對大鼠血睪屏障的影響及其機制探討.pdf

1、目的：乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）垂直傳播是指HBV以生殖細(xì)胞作為載體，把HBVDNA帶入胚胎，使子代發(fā)病或成為HBV攜帶者的一種新的、尚待證明的傳播方式。HBV父嬰垂直傳播研究的關(guān)鍵點在于闡明HBV通過血睪屏障轉(zhuǎn)染精子的途徑。本課題通過活體轉(zhuǎn)染不同組的大鼠睪丸，旨在探討機體人蕈攝入乙醇后，血睪屏障（blood-testis barrier，BTB）的結(jié)構(gòu)完整性和生理機能的改變，以及能否有效阻止含HBV D

2、NA的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染生精小管生精上皮細(xì)胞，并進(jìn)一步探討影響B(tài)TB完整性的因素和作用機制。
　　 方法：取20只Wistar成年雄性大鼠隨機分為兩組，每組10只。A組為實驗乙醇組，每只按1ml·100g-1·d-1灌胃50％乙醇，連續(xù)40天；B組為空白組，每只按1ml·100g-1·d-1灌胃生理鹽水，連續(xù)40天。向睪丸轉(zhuǎn)染含HBV DNA的質(zhì)粒，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chainreaction，PCR)、實時熒光定量

3、PCR(Real-time quantitative PCR，Real-time PCR)、原位雜交（in situ hybridization，ISH）和透射電子顯微鏡（transmission electron microscopy，TEM）檢測睪丸組織HBVDNA的轉(zhuǎn)染情況。
　　 結(jié)果：①PCR.-A組樣本可見特異的HBV DNA陽性條帶；②通過Real-time PCR的檢測發(fā)現(xiàn)A組HBV DNA平均含量高于B組，差異

4、有統(tǒng)計學(xué)意義；③原位雜交：A組發(fā)現(xiàn)陽性雜交信號彌散，可被廣泛發(fā)現(xiàn)于生精上皮基底室和近腔室的生精細(xì)胞上；④TEM:A組大鼠睪丸的生精小管基膜厚薄不均，基膜組織疏松增厚，成波浪式皺褶，可見基膜斷裂，精原細(xì)胞與支持細(xì)胞及生精小管的基膜之間出現(xiàn)較多空泡，生精小管、生精上皮、生精細(xì)胞及支持細(xì)胞與相鄰細(xì)胞之間的間隙擴大。
　　 結(jié)論：①乙醇的攝入會破壞大鼠睪丸血睪屏障的完整性，引起生精小管的基膜、支持細(xì)胞等超微結(jié)構(gòu)異常；②血睪屏障的損傷及生