基于核酸研究平臺(tái)的高靈敏電化學(xué)生物傳感器構(gòu)筑及性能研究.pdf

1、基于核酸研究平臺(tái)的高靈敏電化學(xué)生物傳感器構(gòu)筑及性能研究學(xué)位論文完成日期：指導(dǎo)教師簽字：答辯委員會(huì)成員簽字：基于核酸研究平臺(tái)的高靈敏電化學(xué)生物傳感器構(gòu)筑及性能研究個(gè)數(shù)量級。特異性強(qiáng)，具有相對較強(qiáng)的穩(wěn)定性。該方法在l：10稀釋的胎牛血清和緩沖溶液中ATP的檢測結(jié)果一致，表明所構(gòu)筑的核酸適體生物傳感器有望用于實(shí)際樣品體系的檢測。4、凝血酶的含量及活性已被普遍認(rèn)為與許多疾病如血栓、阿爾茨海默病緊密相關(guān)，實(shí)現(xiàn)其簡單，快速，高靈敏檢測尤為重要。本工

2、作設(shè)計(jì)兩個(gè)有著獨(dú)特序列的莖環(huán)探針DNA：識(shí)別探針和信號(hào)探針。識(shí)別探針DNA含有凝血酶核酸適體片段，可以和凝血酶形成配合物，從而打開莖環(huán)，釋放出的TDNA片段可以和信號(hào)探針進(jìn)行雜交識(shí)別，引發(fā)外切酶III識(shí)別切割。通過外切酶III識(shí)別切割，實(shí)現(xiàn)識(shí)別DNA片段的循環(huán)以及二次靶標(biāo)DNA片段的級聯(lián)擴(kuò)增。同時(shí)釋放出大量二茂鐵標(biāo)記的單核苷酸，進(jìn)行電化學(xué)信號(hào)放大。實(shí)驗(yàn)對凝血酶核酸適體堿基數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。該檢測方法針對凝血酶的檢測具有特異性強(qiáng)、靈敏度高等優(yōu)

3、點(diǎn)，針對凝血酶的最低檢測限可達(dá)5pmol／L。同時(shí)該方法具有均相操作、免固定等優(yōu)點(diǎn)。5、基于聚合酶、Nicking酶以及Lambda外切酶組合信號(hào)放大策略，構(gòu)建了一種無標(biāo)記、高靈敏電化學(xué)DNA3’磷酸化酶(PNK)檢測新方法。電極界面組裝莖環(huán)結(jié)構(gòu)DNA，其中DNA3’端標(biāo)記磷酸基團(tuán)。此時(shí)鐵氰化鉀向電極界面的電子轉(zhuǎn)移受到抑制。PNK存在下，去除3’磷酸基團(tuán)。通過DNA聚合酶，使3’端堿基序列延長，Nicking酶識(shí)別切割形成的雙鏈DNA。