基于靶標(biāo)循環(huán)策略的高靈敏DNA生物傳感器構(gòu)筑研究.pdf

1、核酸作為生命的最基本物質(zhì)之一，廣泛存在于動(dòng)植物細(xì)胞和微生物體內(nèi)，并常在生物分析、疾病診斷和食品安全等方面充當(dāng)分析標(biāo)志物，因此，發(fā)展設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單、易于操作和靈敏快速的核酸等溫檢測(cè)新方法成為核酸檢測(cè)領(lǐng)域的主要目標(biāo)，這也是本論文的主要研究?jī)?nèi)容。本論文基于靶標(biāo)循環(huán)及信號(hào)放大策略，構(gòu)筑得到了三種新型DNA生物傳感檢測(cè)平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)核酸高靈敏、高選擇性分析檢測(cè)。主要內(nèi)容如下:
　　1.利用靶標(biāo)循環(huán)自催化策略，發(fā)展了一種無(wú)標(biāo)記、超靈敏的電化學(xué)方法檢

2、測(cè)DNA。該方法具有探針設(shè)計(jì)簡(jiǎn)單，靈敏度高，可靠性高等特點(diǎn)。在電極表面組裝莖環(huán)DNA，抑制了[Fe(CN)6]3-/4-向電極表面的擴(kuò)散。靶標(biāo)DNA存在時(shí)，打開(kāi)莖環(huán)。在聚合酶的輔助作用下實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)循環(huán)，此為第一步循環(huán);然后在切刻內(nèi)切酶和外切酶的作用下，實(shí)現(xiàn)了次級(jí)靶標(biāo)的循環(huán)，完成第二步循環(huán)。利用兩步循環(huán)放大，實(shí)現(xiàn)了對(duì)靶標(biāo)的高靈敏檢測(cè)，檢測(cè)限達(dá)到10fM。此外，還可以擴(kuò)展到其它分析物的檢測(cè)應(yīng)用中，同時(shí)為發(fā)展無(wú)標(biāo)記、超靈敏電化學(xué)生物傳感器提供了

3、新的思路。
　　2.利用催化莖環(huán)自組裝策略，發(fā)展了一種無(wú)酶、高靈敏的方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)靶標(biāo)DNA的電化學(xué)高靈敏檢測(cè)。我們?cè)O(shè)計(jì)了兩個(gè)莖環(huán)DNA，靶標(biāo)DNA存在時(shí)，催化莖環(huán)自組裝成雙鏈，能夠與電極表面的探針雜交，使二茂鐵靠近電極表面，產(chǎn)生電化學(xué)信號(hào)。該策略在探針的設(shè)計(jì)，傳感器的制造以及無(wú)酶操作等方面具有簡(jiǎn)單快速的優(yōu)勢(shì)。此外可以簡(jiǎn)單的擴(kuò)展到廣譜多分析物檢測(cè)。我們提出的鏈置換反應(yīng)的調(diào)控技術(shù)，在未來(lái)的生物分析和DNA納米技術(shù)方面具有巨大的應(yīng)用潛力