基于莖環(huán)自組裝擴(kuò)增的電化學(xué)生物傳感器高靈敏與高特異檢測(cè)DNA.pdf

1、DNA(脫氧核糖核酸)，是生物體遺傳信息的攜帶者。近年的研究發(fā)現(xiàn)，帶有遺傳信息的DNA片段的異常表達(dá)與疾病和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)。傳統(tǒng)方法檢測(cè)DNA具有操作復(fù)雜、成本高、耗時(shí)長(zhǎng)等局限性。因此,建立一種簡(jiǎn)便、靈敏和特異的DNA定量檢測(cè)新方法具有十分重要的意義。本課題整合莖環(huán)自組裝擴(kuò)增技術(shù)和酶催化信號(hào)放大策略,構(gòu)建了一種簡(jiǎn)單的、等溫的電化學(xué)生物傳感器，實(shí)現(xiàn)了DNA的高靈敏和高特異檢測(cè)：首先，靶DNA通過堿基互補(bǔ)與生物素標(biāo)記的莖環(huán)H

2、1雜交，打開H1的莖環(huán)結(jié)構(gòu)；隨后，打開的莖環(huán)H1與莖環(huán)H2雜交，將靶DNA置換下來，生成H1-H2復(fù)合物；被置換下來的靶DNA促發(fā)下一輪莖環(huán)自組裝擴(kuò)增反應(yīng)，生成大量的H1-H2復(fù)合物；最后，金電極表面固定的捕獲探針與H1-H2復(fù)合物特異性雜交，形成捕獲探針-H1-H2復(fù)合物。金電極表面形成的捕獲探針-H1-H2復(fù)合物上的生物素與鏈霉親和素標(biāo)記的堿性磷酸酶結(jié)合，催化底物α-萘磷酸鈉鹽產(chǎn)生電化學(xué)信號(hào)。為減少莖環(huán)之間的非特異性雜交反應(yīng)，本研究