基于DNA循環(huán)放大的光學(xué)生物傳感器的研究.pdf

1、本論文的主要內(nèi)容是將DNA循環(huán)放大技術(shù)、雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)、比色分析技術(shù)、化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)與表面增強(qiáng)拉曼檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合，研制出高選擇性、高靈敏度的傳感分析方法，對(duì)DNA以及生物分子的檢測(cè)提供了基礎(chǔ)性研究資料。本文重點(diǎn)介紹了三種傳感分析方法的構(gòu)建、性質(zhì)以及其相關(guān)應(yīng)用的研究:
　　1.本試驗(yàn)研究了一種新型的基于酶循環(huán)放大和雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)DNA的方法。首先，由于結(jié)合了循環(huán)放大技術(shù)以及雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)雙重放大，使得這種定量檢測(cè)目標(biāo)DNA的

2、方法具有較高的靈敏度和較快的檢測(cè)速度，檢測(cè)限可達(dá)1.0×10-16M;其次，引用了磁性納米微球，有效的降低了背景信號(hào)值。最后，反應(yīng)體系加入標(biāo)記了親和素的辣根過(guò)氧化物酶（HRP），通過(guò)親和素與生物素之間的特異性結(jié)合，使得它可以跟含有生物素的DNA鏈結(jié)合并形成OPDA-H2O2-HRP體系，最終用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)產(chǎn)生的信號(hào)。由于所測(cè)DNA的含量跟OPDA-H2O2-HRP體系顯色程度有關(guān)，并在一定范圍內(nèi)成比例關(guān)系，因此可定量的檢測(cè)溶液中D

3、NA含量。
　　2.在結(jié)合前期酶循環(huán)放大的工作基礎(chǔ)上，創(chuàng)建了一種基于鄰近連接放大技術(shù)(PDCA)的高度靈敏性和選擇性的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)可卡因的方法。其主要的工作原理描述如下:首先，創(chuàng)建了兩條新型的可卡因適體探針，探針?lè)謩e由三部分組成，包括可卡因適體序列、剪切酶特異性識(shí)別序列以及與外加DNA發(fā)卡結(jié)構(gòu)雜交序列。在可卡因以及外加發(fā)卡DNA存在的條件下，這兩條探針可以與之形成特定的復(fù)合體結(jié)構(gòu)，當(dāng)內(nèi)切酶與聚合酶加入時(shí)，鄰近連接放大反應(yīng)被激活，為

4、了更好的降低檢測(cè)限，對(duì)上述生成的信號(hào)DNA又進(jìn)行了一次酶循環(huán)放大。最終，反應(yīng)體系加入標(biāo)記了親和素的辣根過(guò)氧化物酶(HRP)，使得它可以跟含有生物素的DNA鏈結(jié)合并形成Luminol-H2O2-HRP體系，通過(guò)luminol-H2O2-HRP流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光檢測(cè)化學(xué)發(fā)光信號(hào)并分析可卡因的量，靈敏度可達(dá)到1.0×10-9M。
　　3.在以上化學(xué)發(fā)光可卡因適體傳感器的研究基礎(chǔ)上，引入了表面增強(qiáng)拉曼技術(shù)(SERS)，創(chuàng)建了一種新型的基于表