加工方法對轉(zhuǎn)Bt抗蟲水稻內(nèi)外源DNA降解作用的研究.pdf

1、隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的快速發(fā)展，越來越多的轉(zhuǎn)基因作物進入商品化階段，轉(zhuǎn)基因作物和其加工制品已進入人們的日常生活，隨之對人類以及生態(tài)環(huán)境的影響備受公眾關(guān)注。本文以轉(zhuǎn)Bt抗蟲水稻“華恢1號”為原料，采用不同加工方法，研究其內(nèi)外源DNA在加工過程中的降解變化，以利相關(guān)檢測方法的建立，為今后我國轉(zhuǎn)基因水稻加工制品的檢測監(jiān)管提供科學依據(jù)和技術(shù)支持。
　　PCR方法定性研究不同加工方法對轉(zhuǎn)Bt抗蟲水稻的內(nèi)外源DNA的降解作用。以轉(zhuǎn)Bt抗蟲水稻“華恢

2、1號”及其陰性對照“明恢63”為原料，選擇煮制、高壓煮制處理、米果加工和米酒發(fā)酵等加工方法，并針對內(nèi)源基因（SPS基因）、外源基因或元件（包括actin1啟動子、Cry1Ab/Ac基因、外源基因3'端接合序列、NOS終止子）設(shè)計不同擴增片段大小的引物，PCR擴增后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。結(jié)果表明:不同形式的加工方法對水稻的內(nèi)外源DNA產(chǎn)生了不同程度的降解作用。高壓煮制處理對轉(zhuǎn)基因水稻內(nèi)外源DNA的降解作用大于煮制;在米果加工中，經(jīng)過煮制

3、、一次干燥和二次干燥加工后，油炸處理對轉(zhuǎn)基因水稻內(nèi)外源DNA的降解作用最大，隨后依次是焙烤和微波處理;在米酒加工中，經(jīng)過煮制對轉(zhuǎn)基因水稻內(nèi)外源DNA降解后，米酒發(fā)酵過程并沒有使轉(zhuǎn)基因水稻內(nèi)外源DNA產(chǎn)生進一步的降解;實驗中長度小于200 bp的擴增片段在所有加工過程中均可以被檢測出，具有較高的穩(wěn)定性。
　　熒光定量PCR方法定量研究不同加工方法對轉(zhuǎn)Bt抗蟲水稻的內(nèi)外源DNA的降解作用。在定性研究的基礎(chǔ)上，進行熒光定量PCR檢測與分

4、析。結(jié)果表明，試驗中長度小于200 bp的擴增片段在加工過程也會發(fā)生不同程度的降解。不同加工處理對轉(zhuǎn)基因水稻內(nèi)外源DNA產(chǎn)生了不同程度的降解作用，對于SPS基因、actin1啟動子、Cry1Ab/Ac基因、外源基因3'端接合序列、NOS終止子，油炸處理的降解率分別為99.9％、99.9％、99.8％、99.8％、99.9％;焙烤處理內(nèi)外源DNA的降解率分別為98.4％、98.7％、98％、97.9％、98.2％;微波處理內(nèi)外源DNA降解

5、率分別為86.1％、89.5％、88.7％、84.1％、89.3％;酒釀處理內(nèi)外源DNA的降解率分別為75.6％、79.5％、77.2％、74.5％、77.1％?？梢钥闯鰧D(zhuǎn)基因水稻內(nèi)外源DNA的降解作用由大到小，依次為油炸、焙烤、微波、酒釀發(fā)酵。高壓煮制處理對于相應(yīng)的內(nèi)外源DNA的降解率分別為74.9％、80.4％、77.5％、73.8％、77.5％。普通蒸煮對于相應(yīng)的內(nèi)外源DNA的降解率分別為74.4％、77.6％、76.1％、73