轉Bar、Bt基因雙抗稻米定性檢測及其重組DNA降解的研究.pdf

1、伴隨著環(huán)境的惡化及資源的短缺，世界范圍內正面臨著一場糧食危機，轉基因技術也因此在農業(yè)生產中得以迅速發(fā)展與應用。時至今日，越來越多的轉基因作物進入商品化階段，直接或者間接的進入到人們的食物鏈中。轉基因作物及其制品對人類健康和生態(tài)環(huán)境的影響越來越引起公眾的關注，各國政府紛紛出臺了一系列針對轉基因生物的法律法規(guī)。檢測是監(jiān)管的前提，本實驗對轉Bar、Bt基因雙抗稻米的定性檢測方法進行了探索，同時還對轉基因雙抗稻米內外源基因的在加工過程中的降解規(guī)

2、律進行了研究，具體內容如下:
　　 以轉Bar、Bt基因雙抗稻米為原料，旨在建立一種快速、有效的轉基因雙抗稻米定性檢測方法，為我國轉基因稻米的檢測、安全評估以及溯源研究提供技術支持。實驗針對水稻內源基因SPS和外源重組基因（包括Bar基因、Bt基因、CaMV35S啟動子、Ubiquitin啟動子和NOS終止子）設計了六對引物，通過退火溫度的優(yōu)化建立起了兩套三重PCR檢測體系，第一套體系可同時檢測SPS基因、Ubquitin啟動子

3、、Bt基因，第二套體系可同時檢測CaMV35S啟動子、NOS終止子、Bar基因。兩套體系的反應條件為:預變性94℃5min;變性94℃1min，退火57℃40s，延伸72℃40s，40個循環(huán);72℃延伸7min。結果表明，應用這兩套三重PCR檢測體系可快速檢測出原料中的全部六條目標基因，可用于轉Bar、Bt基因雙抗稻米及其初級加工品的檢測，檢測靈敏度可達0.5％。同時，各引物的加入量相同，兩套體系的反應條件也相同，不需要使用梯度退火溫度

4、，操作簡單，對儀器要求也較低，具有經濟、高通量的優(yōu)點。
　　 通過針對SPS基因、CaMV35S啟動子、Ubiquitin屆動子、NOS終止子、Bar基因和Bt基因進行不同大小片段的PCR擴增以研究雙抗稻米內外源基因在加工過程中的降解規(guī)律。試驗結果表明，不同加工方式對基因的降解作用有所區(qū)別:在四天的發(fā)酵結束后，酒釀樣品中能檢測到的SPS基因、CaMV35S啟動子、Ubiquitin啟動子、NOS終止子、Bar基因和Bt基因的最長

5、片段分別為916bp，446bp，133bp，180bp，370bp以及635bp片段。在酒釀的制作過程中，最穩(wěn)定的基因是NOS終止子，接下來依次是Bar基因、CaMV35S啟動子、Bt基因、SPS基因和Ubiquitin啟動子。而在五種不同的熱加工方式中，最劇烈的處理方式是油炸，焙烤次之，然后依次是焙烤、發(fā)酵、微波和普通蒸煮，而高壓蒸煮對文中6個目標基因的降解作用與普通蒸煮相比幾乎沒有差別。最穩(wěn)定的基因是CaMV35S啟動子，NOS終