DNA shuffling技術改造Bt基因的水稻轉化研究.pdf

1、水稻是主要糧食作物之一，全世界有超過20億的人口以水稻為主食。蟲害是造成水稻減產的主要原因之一。在現代農業(yè)中，使用化學殺蟲劑為減少蟲害損失起到了巨大作用。但是，化學殺蟲劑的使用會不可避免的造成環(huán)境污染以及威脅人類健康。利用轉基因技術培育具有抗蟲性狀的品種是一種控制害蟲的有效方法。 目前使用最廣泛的是Bt基因，其毒蛋白能破壞昆蟲的中腸上皮細胞，具有高度專一的抗蟲性。然而長期使用Bt殺蟲使目標昆蟲對Bt毒蛋白產生了耐受性，天然的Bt

2、基因并不總是能達到良好的殺蟲效果。為了解決此問題，我們運用DNAShuffling技術把Bt基因進行改組，獲得了一批克隆子。體外喂蟲實驗顯示這些重組后的Bt基因較原始基因殺蟲性有很大提高。 本試驗以此為基礎，用優(yōu)良的粳稻品種中花11為受體材料，利用農桿菌介導的遺傳轉化方法將14個重組后的Bt基因轉入水稻，希望能在水稻中表達高效的殺蟲蛋白。并且獲得了一批外源基因單拷貝插入，抗蟲性優(yōu)良的轉基因株系。 主要結果如下：

3、1.挑選了Cry1ab、Cry1Ac、Cry1C、Cry9C和Cry2A重組后的14個子基因(722，723，724，738，906，983，385，932，936，185，897，977，901，119)以及對照Cry1Ab，Cry1Ac和Cry2A構建了植物表達載體，并分別轉化中花11胚性愈傷；每個片段平均獲得抗性植株80棵左右。 2.通過對轉化植株的PCR陽性檢測，獲得了約75％的陽性單株。 3.通過Souther