Bt Cry3Aa基因轉(zhuǎn)化歐美楊的研究.pdf

1、提高生產(chǎn)中主栽速生楊樹品種的抗天牛能力，對楊樹人工林的進一步增產(chǎn)增收，擴大栽培區(qū)域有重大現(xiàn)實意義。歐美楊108(Populus×euramericana‘Guariento’)、歐美楊2001(Populus×euramericana‘2001’)是理想的基因工程改良的載體。研究以這2個品種為材料，首先優(yōu)化了其植株再生系統(tǒng)；并且采取農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，嘗試將Bt Cry3Aa外源基因?qū)W美楊108和歐美楊2001進行了轉(zhuǎn)化，得到較為完整的遺傳

2、轉(zhuǎn)化條件。
　　現(xiàn)初步得到以下結(jié)論：
　　1．培養(yǎng)基最適 PH值為6.8。在本試驗系統(tǒng)中，培養(yǎng)基 PH值滅菌后較滅菌前會降低，下降幅度大約在0.5左右，歐美楊108和歐美楊2001外植體生長最適宜PH值為6.3，并且兩個品種沒有差異，滅菌前培養(yǎng)基PH值調(diào)整為6.8最為合適。
　　2．歐美楊108和歐美楊2001愈傷組織誘導(dǎo)表型一致，最適宜的培養(yǎng)基為：MS+2,4-D2mg/L。在通過對比愈傷組織的大小、色澤、質(zhì)地、生長

3、量進行對比分級，相同培養(yǎng)時間，此種培養(yǎng)基誘導(dǎo)愈傷量最大。以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加入2,4-D2mg/L時，歐美楊108愈傷率為60.07％，歐美楊2001愈傷率為40.65％；加入6-BA1mg/L+2,4-D2mg/L兩種激素時108、2001的愈傷率分別為36.67％、29.67％。因此，本試驗所用的愈傷組織增殖培養(yǎng)基選用 MS+2,4-D2mg/L。
　　3．愈傷組織最適芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：MS+KT0.1mg/L+6-BA

4、1 mg/L，此種培養(yǎng)基可使歐美楊108和歐美楊2001松散的愈傷組織逐漸緊實，進而長出小芽。將疏松的愈傷組織誘導(dǎo)出芽并不容易，適宜的激素組合加上適宜的激素濃度，在人工調(diào)控的適宜環(huán)境下，才能成功將疏松的愈傷組織誘導(dǎo)出芽。其中， MS+6-BA1mg/L+KT0.1mg/L培養(yǎng)基，歐美楊108和歐美楊2001的發(fā)芽率分別為53.30％、48.65％，48+6-BA1mg/L+KT1mg/L培養(yǎng)基，歐美楊108和歐美楊2001的發(fā)芽率分別為

5、17.95％、17.86％，MS+NAA0.05mg/L+6-BA1mg/L+KT0.1mg/L培養(yǎng)基，歐美楊108和歐美楊2001的發(fā)芽率分別為4.76％、5.88％。
　　4．抑制不同外植體分化的臨界卡那霉素濃度確定。楊樹莖段作為材料進行卡那霉素濃度梯度試驗時，濃度梯度為30mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L、80mg/L、90mg/L、100mg/L，以不加卡那霉素的培養(yǎng)基接種莖段薄片作為 CK，每個梯度培養(yǎng)

6、基上接種30個左右莖段薄片，在經(jīng)過25d培養(yǎng)和觀察，卡那霉素50mg/L的培養(yǎng)基上，歐美楊108、歐美楊2001的材料長出愈傷率達到10.53％、18.18％，卡那霉素60mg/L的培養(yǎng)基上愈傷率為5.00％、9.38％，卡那霉素濃度70mg/L以上的培養(yǎng)基，歐美楊108和歐美楊2001材料全部白化死亡。愈傷組織篩選過程和梯度設(shè)置同莖段。因此，選擇70mg/L為本研究莖段和愈傷組織所需的卡那霉素篩選適宜濃度。楊樹葉柄、葉片作為材料時延續(xù)