蜘蛛香總黃酮的提取純化及抗腫瘤作用研究.pdf

1、目的:
　　 研究敗醬科(Valerianaceae)纈草屬(ValerianaLinn)植物蜘蛛香(ValerianajatamansiJones)黃酮類化合物的提取純化工藝及抗腫瘤作用。
　　 方法:
　　 采用超聲波提取法,以總黃酮為指標(biāo),通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)篩選蜘蛛香總黃酮提取的最佳工藝。進(jìn)一步利用大孔樹脂純化總黃酮,采用靜態(tài)吸附一解吸方法,以吸附量和解吸率為指標(biāo),篩選最佳樹脂并對(duì)該樹脂的動(dòng)態(tài)吸附和洗

2、脫條件進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)研究,得到了較好的蜘蛛香總黃酮純化工藝。采用小鼠H22肝癌、S180纖維肉瘤模型,觀察蜘蛛香總黃酮的抗腫瘤藥效作用。
　　 結(jié)果:
　　 以總黃酮為指標(biāo),經(jīng)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)篩選,確定蜘蛛香超聲提取最佳工藝為20倍量6596乙醇、提取20分鐘、提取3次。
　　 采用大孔樹脂純化總黃酮。采用靜態(tài)吸附-解吸方法,以吸附量和解吸率為指標(biāo),篩選最佳樹脂為HPD600；對(duì)HPD600大孔樹脂的動(dòng)態(tài)吸附

3、和洗脫條件進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)研究,得到了較好的純化方法:最佳動(dòng)態(tài)吸附、洗脫條件為蜘蛛香總黃酮提取液質(zhì)量濃度3.42mg·mL-1,吸附流速2.4BV·h-1,上樣量25.64mg·g-1干樹脂；吸附后的樹脂柱先以3BV水洗脫,再用4BV80％乙醇以2.4BV·h-1流速洗脫,總黃酮質(zhì)量分?jǐn)?shù)為41.20％,收率為80.36％。
　　 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,蜘蛛香總黃酮對(duì)腫瘤生長(zhǎng)有抑制作用。對(duì)H22腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用:蜘蛛香總黃酮高、中、

4、低劑量組和替加氟組的抑瘤率分別為:19.25％、30.06％、25.97％及45.32％,且與模型組的平均瘤重相比,蜘蛛香總黃酮中、低劑量組有顯著差異(p(0.05),替加氟組具有極顯著性差異(p<0.01)。對(duì)S180腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用:蜘蛛香總黃酮高、中、低劑量組和替加氟組的抑瘤率分別為:30.80％、41.53％、45.57％及59.97％,且與模型組的平均瘤重相比,蜘蛛香總黃酮高、中、低劑量組有顯著差異(p<0.05),替加氟組

5、具有極顯著性差異(p<0.01)。對(duì)H22和S180荷瘤小鼠的免疫器官胸腺初步觀察表明,與正常組胸腺指數(shù)相比,兩種荷瘤小鼠模型組有下降趨勢(shì)但無差異；替加氟組降低,且具有極顯著性差異(p<0.01)；蜘蛛香總黃酮給藥組與正常組無明顯差別。與模型組胸腺指數(shù)相比,蜘蛛香總黃酮給藥組有升高趨勢(shì),其中H22中、低劑量組具有顯著差異(p<0.05)。病理形態(tài)學(xué)觀察表明,兩種荷瘤小鼠模型組均出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞數(shù)量多而密集,形態(tài)異型性明顯,細(xì)胞核大。替加氟組

6、和蜘蛛香總黃酮給藥各組出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞壞死現(xiàn)象。
　　 結(jié)論:
　　 經(jīng)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)篩選,蜘蛛香超聲提取最佳工藝為20倍量65％乙醇、提取20分鐘、提取3次。經(jīng)單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)選,蜘蛛香總黃酮的最佳純化工藝為:HPD600大孔樹脂、上樣濃度3.42mg·mL-1,吸附流速2.4BV·h-1,上樣量25.64mg·g-1干樹脂；吸附后的樹脂柱先以3BV水洗脫,再用4BV80％乙醇以2.4BV·h-1流速洗脫。藥效學(xué)實(shí)