皂角刺總黃酮的提取及抗腫瘤細(xì)胞株的活性研究.pdf

1、目的:以不同極性溶劑分別回流提取中藥皂角刺總黃酮中有效組分,以CCK-8法進(jìn)行活性篩選,通過硅膠柱層析分離,測(cè)定皂角刺總黃酮各分離樣品對(duì)體外三種腫瘤細(xì)胞增殖作用的影響,旨在為皂角刺總黃酮的進(jìn)一步分離及制備單體的研究提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:在前期實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上,以最佳的提取工藝條件回流提取皂角刺總黃酮內(nèi)各組分,以CCK-8法進(jìn)行篩選后,對(duì)有效組分進(jìn)行硅膠柱層析,根據(jù)薄層色譜結(jié)果,對(duì)所得樣品進(jìn)行鑒定。最后分別選用HCT116人結(jié)腸癌細(xì)胞

2、株, Bel-7402人肝癌細(xì)胞株,K562人白血病細(xì)胞株,體外培養(yǎng)于含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基,置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中。取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞,調(diào)整合適的細(xì)胞懸液密度,分別接種于96孔培養(yǎng)板,用不同濃度(12.5、25、50、100、200μg·mL-1)的皂角刺總黃酮正丁醇提取物各分離樣品分別處理48小時(shí)后,以CCK-8法測(cè)定皂角刺總黃酮正丁醇提取物各分離樣品對(duì)體外腫瘤細(xì)胞增殖作用的影響,并對(duì)2組間數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn),

3、分析兩者是否存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:皂角刺總黃酮正丁醇提取物對(duì)各腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用隨著濃度的增加而增強(qiáng),呈現(xiàn)出較好的濃度依賴性。皂角刺總黃酮正丁醇提取物對(duì)K562人白血病細(xì)胞株, HepG2人肝癌細(xì)胞株,Bel-7402人肝癌細(xì)胞株,HCT116人結(jié)腸癌細(xì)胞株IC50分別為77.58±28.98,88.61±18.05,66.80±25.65,49.30±12.43mg·L-1,提示皂角刺總黃酮正丁醇提取物有較強(qiáng)的體外抗腫瘤活性。經(jīng)過

4、硅膠柱層析,得皂角刺總黃酮正丁醇提取物各分離樣品,以薄層色譜確定其在分離過程中未發(fā)生化學(xué)變化。以CCK-8法測(cè)定皂角刺總黃酮正丁醇提取物各分離樣品對(duì)體外腫瘤細(xì)胞增殖作用,樣品A對(duì)腫瘤細(xì)胞生長的抑制活性在3種受試腫瘤細(xì)胞中都能觀察到,具有較廣的抗腫瘤活性,它們的IC50分別為85.55±33.44,24.54±5.36,77.08±19.79μg·mL-1。樣品B對(duì)各腫瘤細(xì)胞的抑制作用均不明顯。樣品C對(duì)Bel-7402人肝癌細(xì)胞株和K56

5、2人白血病細(xì)胞株的抑制作用較為明顯,基本呈現(xiàn)為濃度依賴性,它們的IC50分別為54.41±16.71,139.5±53.03μg·mL-1。樣品D對(duì)HCT116人結(jié)腸癌細(xì)胞株的抑制作用呈現(xiàn)較為明顯的濃度依賴性,它的IC50為87.31±17.78μg·mL-1。樣品E對(duì)HCT116人結(jié)腸癌細(xì)胞株和K562人白血病細(xì)胞株呈現(xiàn)較為明顯的濃度依賴性,特別是對(duì)HCT116人結(jié)腸癌細(xì)胞株,當(dāng)給藥濃度達(dá)到200μg·mL-1時(shí),抑制率明顯增加。它們

6、的IC50分別為90.87±22.83,135.63±33.37μg·mL-1。而樣品F則對(duì)HCT116人結(jié)腸癌細(xì)胞株和K562人白血病細(xì)胞株具有抑制作用,并且呈現(xiàn)了較為平穩(wěn)的濃度依賴性,它的IC50分別為81.73±12.45,76.05±12.02μg·mL-1。P<0.05,表明皂角刺總黃酮正丁醇提取物及其各分離樣品的抗腫瘤活性差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.選用CCK-8法測(cè)定可知,皂角刺總黃酮正丁醇提取物具有較強(qiáng)的體外抗腫瘤活性