白藜蘆醇對(duì)子宮內(nèi)膜癌ishikawa細(xì)胞株抗腫瘤活性及相關(guān)通路實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究白藜蘆醇對(duì)子宮內(nèi)膜癌ishikawa細(xì)胞株的抑增殖、侵襲效能，探討白藜蘆醇抗腫瘤作用的可能的信號(hào)通路，以期為臨床治療提供新的思路。
　　方法：體外培養(yǎng)Ishikawa細(xì)胞株，以各濃度白藜蘆醇(0、25、50、100μM)、各時(shí)間段(12、24、48h)作用，應(yīng)用MTT法測(cè)定對(duì)其增殖的影響;Transwell實(shí)驗(yàn)測(cè)定對(duì)其侵襲能力的影響;以0、50μM濃度的白藜蘆醇作用24h，以Agilent芯片篩選出差異表達(dá)的miRNA表

2、達(dá)譜;結(jié)合近期文獻(xiàn)，篩選出可能的靶miRNA，即miR-181a，通過(guò)RT-PCR實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其表達(dá);并以western blot法檢測(cè)白藜蘆醇各濃度作用24h后miR-181a的靶基因SIRT1，及其下游STAT3、AC-STAT3、P-STAT3蛋白表達(dá)情況; Ad-miR-181a重組腺病毒質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，設(shè)三組（空白組、轉(zhuǎn)染Ad-miR-181a組、白藜蘆醇+轉(zhuǎn)染Ad-miR-181a組），通過(guò)PCR實(shí)驗(yàn)觀察各組中miR-181a及S

3、IRT1的mRNA表達(dá)情況，通過(guò)western blot實(shí)驗(yàn)觀察SIRT1、STAT3、AC-STAT3、P-STAT3、cyclinD1及MMP9各蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：白藜蘆醇作用ishikawa細(xì)胞24h、48h，以濃度依賴的方式抑制ishikawa細(xì)胞體外增殖;且各時(shí)間段均削弱了細(xì)胞的侵襲能力;白藜蘆醇作用下，細(xì)胞中28種miRNA表達(dá)量明顯下調(diào)，23種miRNA表達(dá)量明顯上調(diào);24h作用時(shí)間下，SIRT1蛋白表達(dá)量隨

4、藥物濃度升高而升高、總STAT3無(wú)變化、AC-STAT3及P-STAT3的蛋白表達(dá)量均隨著濃度升高而降低;轉(zhuǎn)染Ad-miR-181a組對(duì)比空白組，miR-181a表達(dá)明顯增加，SIRT1的mRNA表達(dá)無(wú)明顯變化，而聯(lián)合白藜蘆醇組對(duì)比單純轉(zhuǎn)染組則可以明顯下調(diào)miR-181a的mRNA表達(dá)，且明顯上調(diào)SIRT1的mRNA表達(dá);轉(zhuǎn)染Ad-miR-181a組對(duì)比空白組，ishikawa細(xì)胞中SIRT1蛋白表達(dá)量明顯下降，AC-STAT3、cyc

5、linD1及MMP9蛋白量表達(dá)明顯上升，P-STAT3及STAT3蛋白表達(dá)量無(wú)明顯變化，聯(lián)合白藜蘆醇組對(duì)比單純轉(zhuǎn)染組，SIRT1蛋白表達(dá)量明顯增加，AC-STAT3、P-STAT3、cyclinD1及MMP9蛋白表達(dá)量明顯減少，STAT3無(wú)明顯變化。
　　結(jié)論：白藜蘆醇可以明顯抑制ishikawa細(xì)胞的增殖及侵襲，而且可以下調(diào)miR-181a的表達(dá)，上調(diào)sirt1的mRNA及蛋白表達(dá)量，降低AC-STAT3及P-STAT3的蛋白表