Tie2-siRNA表達載體對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞株作用的研究.pdf

1、目的：子宮內(nèi)膜癌是位居第四位的導致女性死亡的惡性腫瘤，在子宮內(nèi)膜癌腫瘤發(fā)生發(fā)展的血管生成過程中，過度表達的Tie2基因起到非常重要的作用，為了更好的研究Tie2基因在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用，我們采用RNA干擾技術敲除Tie2基因，降低Tie2基因的轉(zhuǎn)錄及表達，以研究其功能。
　　 方法我們將表達Tie2-siRNA的堿基片段插入含有CMV啟動子、新霉素抗性基因及綠色熒光蛋白報告基因的質(zhì)粒中，應用脂質(zhì)體包涵體技術將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入子宮

2、內(nèi)膜癌Ishikawa細胞株，以減少Tie2基因的表達。隨后借助綠色熒光蛋白報告基因及新霉素抗性基因篩選出穩(wěn)定表達單克隆細胞株，并采用逆轉(zhuǎn)錄PCR及蛋白印跡方法鑒定。成功獲得穩(wěn)定表達單克隆細胞株后，用MTT實驗描繪各組細胞增殖曲線，DAPI染色及流式細胞術檢測各組細胞凋亡，Transwell實驗估測細胞侵襲能力，不同濃度卡鉑處理細胞檢測各組細胞的化療敏感性。
　　 結(jié)果成功篩選出表達Tie2-siRNA的穩(wěn)定表達單克隆細胞株，其

3、Tie2基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平及蛋白表達水平抑制率分別為77％及59％，研究發(fā)現(xiàn)，Tie2-siRNA組細胞生長增殖能力下降，凋亡率增加，侵襲能力下降，化療敏感性增加。其細胞增殖抑制率為73.86％，凋亡率為35.90％，侵襲能力抑制率約63.51％，空白對照組的卡鉑：IC50為80.55±1.05ug/ml，與其相比，Tie2-siRNA組的卡鉑IC50下降明顯，僅為29.95±0.68ug/ml。
　　 結(jié)論本實驗說明體外下