重組hIl-24聯(lián)合順鉑對子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細(xì)胞株生長的影響.pdf

1、目的：用重組人白細(xì)胞介素-24(rhIL-24)聯(lián)合順鉑(DDP)抑制子宮內(nèi)膜癌HEC-1B細(xì)胞株的研究，探索體外用藥的有效劑量，進(jìn)行抗腫瘤機制的研究，為臨床應(yīng)用rhIL-24聯(lián)合順鉑治療子宮內(nèi)膜癌提供理論指導(dǎo)。
　　 方法：
　　 (1)將100μl濃度為2×104個細(xì)胞/ml的HEC-1B細(xì)胞和2x104個細(xì)胞/ml的WI-38細(xì)胞分別加入96孔板，在37℃、5％CO2及飽和濕度條件下的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞完全貼

2、壁生長后，分別加入濃度為80ng/ml、100ng/ml、120ng/ml、150ng/ml、200ng/ml的rhIL-24和濃度為5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml的DDP，在同樣條件下繼續(xù)培養(yǎng)24h、48h、72h，以CCK-8法分別檢測細(xì)胞生長抑制率。
　　 (2)將100μl濃度為2x104個細(xì)胞/ml的HEC-1B細(xì)胞和2×104個細(xì)胞/ml的wI-38細(xì)胞分別加入96孔板，

3、在37℃、5％CO2及飽和濕度條件下的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞完全貼壁生長后，加入120ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的DDP，分別在24h、48h、72h，以CCK-8法檢測細(xì)胞生長聯(lián)合作用抑制率。
　　 (3)將100μl濃度為2x104個細(xì)胞/ml的HEC-1B細(xì)胞和2x104個細(xì)胞/ml的WI-38細(xì)胞分別加入50ml培養(yǎng)瓶中，在37℃、5％CO2及飽和濕度條件下的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞完全貼壁生長后，分

4、別加入120ng/ml的rhIL-24，10μg/ml的DDP，120ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的DDP，培養(yǎng)24h，以流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。
　　 (4)將100μl濃度為2×104個細(xì)胞/ml的HEC-1B細(xì)胞和2×104個細(xì)胞/ml的WI-38細(xì)胞分別加入50ml培養(yǎng)瓶中，在37℃、5％CO2及飽和濕度條件下的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞完全貼壁生長后，分別加入120ng/ml的rhIL-24，10μg/

5、ml的DDP，120ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的DDP，培養(yǎng)培養(yǎng)24h、48h，在熒光顯微鏡下分別觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化。
　　 結(jié)果：
　　 (1)120ng/ml的rhIL-24對HEC-1B細(xì)胞的生長抑制率分別是18.0％，rhIL-24的濃度過低和濃度過高，其抑制率均低于此濃度；rhIL-24對WI-38細(xì)胞無明顯抑制作用；DDP的抑制率與DDP的不同濃度呈劑量依賴關(guān)系。
　　 (2)1

6、20ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的DDP，在24h，48h，72h對HEC-1B細(xì)胞的生長抑制率分別是59.0％，88.2％，91.9％；對WI-38細(xì)胞的生長抑制率分別是63.1％，88.7％，92.4％。
　　 (3)120ng/ml的rhIL-24，10μg/ml的DDP，F(xiàn)CM檢測在24h時，HEC-1B細(xì)胞的凋亡率分別是：14.5％，26.8％；WI-38細(xì)胞凋亡率分別是：6.8％，17.1％。

7、　　 (4)120ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的DDP，F(xiàn)CM檢測在24h時，HEC-1B細(xì)胞的凋亡率是：29.6％；WI-38細(xì)胞的凋亡率是：20.1％。
　　 (5)120ng/ml的rhIL-24，10μg/ml的DDP，120ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的DDP，熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)變化，可見：正常細(xì)胞不著色；凋亡細(xì)胞染草綠色，可見細(xì)胞核呈不規(guī)律破壞或固縮呈圓珠狀；非凋亡細(xì)胞的死

8、亡細(xì)胞呈整體細(xì)胞染色。
　　 結(jié)論：
　　 (1)不同濃度的rhIL-24對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞有抑制作用，其抑制呈非劑量依賴關(guān)系，其抑制適宜濃度為120ng/ml；不同濃度的DDP對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞有抑制作用，其抑制呈劑量依賴關(guān)系，DDP對正常細(xì)胞亦有抑制作用。
　　 (2)rhIL-24、DDP及兩者聯(lián)合對子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞有抑制作用，聯(lián)合抑制率高于單獨用藥，聯(lián)合用藥具有協(xié)同作用。
　　 (3)rhIL-24、D