LRP16基因?qū)θ俗訉m內(nèi)膜癌HEC-1-B細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:研究攜帶有目的基因LRP16的真核表達(dá)質(zhì)粒EX-Y2069-M29,通過陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HEC-1-B細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率,了解轉(zhuǎn)染前后LRP16基因的表達(dá)情況,并觀察LRR16對(duì)HEC-1-B細(xì)胞增殖的影響。
　　 方法:將LRR16真核表達(dá)載體EX-Y2069-M29和EX-NEG-M29空質(zhì)粒分別用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的HEC-1-B細(xì)胞,以轉(zhuǎn)染空載體EX-NEG-M29的HEC-1-B作為空載體對(duì)照,以HEC-1-B細(xì)胞

2、作陰性對(duì)照,在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染熒光效應(yīng),用RT-PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后LRP16基因的表達(dá),描繪轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,用WST-1法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。
　　 結(jié)果:1.LRP16組、空載體組部分細(xì)胞在熒光顯微鏡下發(fā)綠色熒光,陰性對(duì)照組細(xì)胞未見綠色熒光。2.空白對(duì)照組、空質(zhì)粒組和質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組HEC-1-B細(xì)胞中LRR16mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為0.1231±0.0366、0.1486±0.0287和0.5060±0.0198,

3、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組與其他兩組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=161.547,P=0.0003)。3.轉(zhuǎn)染前后HEC-1-B細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線見,未轉(zhuǎn)染的HEC-1-B細(xì)胞群體倍增時(shí)間為0.8天,對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期在2-6天之間。而轉(zhuǎn)染LRR16的HEC-1-B細(xì)胞群體倍增時(shí)間為2天,對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期在4-6天之間,明顯低于非轉(zhuǎn)染組細(xì)胞。4.LRR16組、空載體組及陰性對(duì)照組HEC-1-B細(xì)胞WES-T比色法測(cè)定,LRP16轉(zhuǎn)染組HEC-1-B細(xì)胞在體外能繼續(xù)增殖,但