IL21及IL12誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌患者PBMCs抗腫瘤活性的研究.pdf

1、目的：觀察IL21及IL12單用或聯(lián)合應(yīng)用對子宮內(nèi)膜癌患者PBMCs抗腫瘤活性的影響，并初步探討相關(guān)機制。
　　 方法：收集2010年3月至2010年7月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院就診的子宮內(nèi)膜癌患者外周血標(biāo)本14例，采用Ficoll密度梯度離心法體外分離得到PBMCs，將細(xì)胞懸浮于RPMI1640培養(yǎng)液[含20％FBS、100×青鏈霉素混合液和IL2(5ng/ml)]，分5組培養(yǎng)，即對照組(IL2組)、抗IL21（2μg/ml）組、I

2、L21(50ng/ml)組、IL12（5ng/ml）組和聯(lián)合組[IL21（50ng/ml）+IL12(5ng/ml)[。將5組細(xì)胞分別接種于6孔板（2×106cells/孔）和96孔板（1×104cells/孔），37℃，5％C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h后，用于下述實驗。以5組經(jīng)不同細(xì)胞因子處理72h的PBMCs為效應(yīng)細(xì)胞，子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞為靶細(xì)胞，效靶比為100:1，采用LDH法檢測PBMCs對Ishikawa細(xì)胞的殺傷活性

3、。每組收集1×106個細(xì)胞，充分洗滌、重懸，Treg細(xì)胞染色時首先行細(xì)胞外抗體染色，然后用Fix/Perm固定和破膜，最后進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)抗體染色；Th17細(xì)胞染色時先用PMA(25ng/ml)，離子霉素（1μg/ml）和莫能霉素（1.7μg/ml）在37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4.5h，其它步驟同上，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測CD4+CD25+FOXP3+T調(diào)節(jié)性細(xì)胞（Treg細(xì)胞）和CD4+IL17A+T輔助17細(xì)胞（Th17細(xì)胞）的含量。96

4、孔板中的5組PBMCs經(jīng)細(xì)胞因子處理72h后，每孔加入10μ1的CCK-8溶液，同時設(shè)置空白對照組，每組3個復(fù)孔，37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4h，檢測PBMCs的增殖能力。收集5組經(jīng)細(xì)胞因子處理72h的PBMCs約1×105個，流式細(xì)胞術(shù)法檢測PBMCs的凋亡率。
　　 結(jié)果：與對照組相比，IL21組、IL12組和聯(lián)合組PBMCs對Ishikawa細(xì)胞的殺傷活性均顯著升高，而且聯(lián)合組比單用IL21組和IL12組誘導(dǎo)的PBMC

5、s殺傷活性也顯著升高(P均＜0.01)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，IL21、IL12及IL21聯(lián)合IL12分別顯著降低了Treg細(xì)胞的含量，抑制了PBMCs的凋亡(P均＜0.05)。使用抗IL21抗體中和培養(yǎng)體系中IL21的生物活性后，PBMCs的殺傷活性顯著降低，Treg細(xì)胞的含量顯著升高，PBMCs的凋亡率顯著升高(P均＜0.05)，從而進(jìn)一步證實了IL21的作用。不同細(xì)胞因子處理組對Th17細(xì)胞的含量和PBMCs的增殖能力均無顯著影響(P均