非離子型表面活性劑復(fù)合雙水相體系及其蛋白質(zhì)分配平衡研究.pdf

1、聚合物/非離子型表面活性劑雙水相體系在膜蛋白的分離過(guò)程中具有顯著的優(yōu)勢(shì)。表面活性劑對(duì)疏水性蛋白的增溶作用使膜蛋白富集于表面活性劑相，親水性蛋白以體積排阻作用富集于聚合物相，從而能夠?qū)⒌拓S度的膜蛋白從細(xì)胞中分離出來(lái)。因此結(jié)合雙水相體系的優(yōu)勢(shì)，開(kāi)展雙水相體系分離膜蛋白的研究，具有重要的意義。本課題針對(duì)聚合物/非離子型表面活性劑雙水相體系中的膠束特性及分配性質(zhì)等方面展開(kāi)研究。主要研究結(jié)果如下：
　?。?）主要考察了不同分子量的DEX與幾

2、種非離子型表面活性劑的相平衡性質(zhì)。與PEG/TX-100或者Tween80雙水相體系的成相性質(zhì)相似，成相區(qū)域隨聚合物分子量的增加而增加；增加體系的離子強(qiáng)度，成相區(qū)域也會(huì)增加。然而非離子型表面活性劑NP40與低分子量的DEX不能成相，與高分子量的DEX-T500和T70的成相行為沒(méi)有明顯的變化。
　　（2）為深入探索 PEG/TX-100雙水相體系中PEG分子對(duì)非離子型表面活性劑TX-100膠束特性的影響，利用粘度法對(duì)非離子型表面活

3、性劑 TX-100水溶液的膠束化行為進(jìn)行表征，研究了PEG分子對(duì)TX-100水溶液膠束特性粘數(shù)[η]和水化程度的影響。結(jié)果表明，在含有 PEG分子的TX-100膠束稀溶液中， PEG的分子量和濃度變化對(duì)膠束的特性粘數(shù)影響并不顯著；但隨著PEG分子量的增加，TX-100膠束的水化程度增加，膠束外殼與水溶液的相互作用增大。進(jìn)一步以苯甲?；阴１桨罚˙ZAA）作為探針，研究 PEG分子對(duì)膠束內(nèi)核極性的影響。結(jié)果顯示 PEG分子對(duì)TX-100膠

4、束內(nèi)核極性具有顯著的影響：PEG濃度越大，表明膠束內(nèi)核極性增加；同時(shí)隨著PEG分子量的增加，對(duì)內(nèi)核極性的影響程度降低。
　?。?）考察了五種親水性模型蛋白在PEG/TX-100雙水相體系中的分配特點(diǎn)。結(jié)果表明：小分子量的蛋白質(zhì)傾向分配于上相，系線長(zhǎng)度越長(zhǎng)，這種趨勢(shì)越顯著；大分子量的蛋白質(zhì)的分配系數(shù)降低，而且系線長(zhǎng)度對(duì)其分配沒(méi)有顯著影響；當(dāng)PEG分子量增加時(shí)，蛋白質(zhì)的分配系數(shù)明顯減小。為深入探索不同類(lèi)型雙水相體系對(duì)模型蛋白分配平衡的

5、影響，又考察了模型蛋白在 PEG/Na2SO4和TX-100/Na2SO4雙水相體系中的分配情況，結(jié)果表明：幾種蛋白均傾向分配于下相，分配系數(shù)隨著系線長(zhǎng)度的增加而減小。蛋白質(zhì)分子量越大，越傾向分配于下相。
　?。?）結(jié)合蛋白質(zhì)分子在雙水相體系中分配的體積排阻和疏水作用模型，對(duì)PEG/TX-100雙水相體系的分配性質(zhì)進(jìn)行定性分析。結(jié)果表明：在PEG/TX-100雙水相體系中，TX-100相的體積排阻作用大于PEG相的體積排阻作用；系

6、線長(zhǎng)度越長(zhǎng)，TX-100相體積排阻作用的增加趨勢(shì)大于PEG相，但是PEG分子量的增加會(huì)降低這種趨勢(shì)。疏水性作用使蛋白傾向分配于下相，系線長(zhǎng)度和PEG分子量的增加使體系的疏水性分辨率R逐漸增加。但是對(duì)雙水相體系的固有疏水性影響不明顯。
　?。?）將PEG/TX-100雙水相體系應(yīng)用于鹽生鹽桿菌膜蛋白的初步分離純化研究。通過(guò)與傳統(tǒng)的膜蛋白分離方法進(jìn)行比較，經(jīng)過(guò)雙水相體系分離后，目標(biāo)蛋白能夠富集于 TX-100相。進(jìn)一步通過(guò)雙水相多級(jí)萃