蛋白質(zhì)的非離子表面活性劑包衣和混合反膠束研究.pdf

1、傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)電泳分析都是在水相緩沖溶液中進(jìn)行且規(guī)模很小.隨著科研發(fā)展和實(shí)際需要,迫切需要半制備或制備型電泳以提高電泳規(guī)模,但同時(shí)由于一般需要加大電泳的電壓或改變其它電泳條件,造成嚴(yán)重的"焦耳熱"現(xiàn)象,溫度升高,引起區(qū)帶擴(kuò)散,分辨率降低甚至蛋白質(zhì)變性等結(jié)果,使得分離失去意義.這已成為了擴(kuò)大電泳規(guī)模的瓶頸. 一般有機(jī)溶劑的介電常數(shù)比水要小,在相同的電壓下有機(jī)溶劑中的電流明顯小于水溶液,從而有效的降低電泳中的電泳熱,達(dá)到擴(kuò)大電泳規(guī)模的

2、目的.然而,蛋白質(zhì)在有機(jī)溶劑中容易變性.要想在有機(jī)溶劑中進(jìn)行電泳分離,如何保護(hù)蛋白質(zhì)是面臨的又一個(gè)挑戰(zhàn). 論文研究了蛋白質(zhì)非離子表面活性劑包衣和混合反膠束兩種體系以降低蛋白質(zhì)在有機(jī)介質(zhì)中的變性,具有重要的理論意義和潛在的應(yīng)用價(jià)值. 論文首先合成了谷氨酸二脂肪醇酯核糖醇一系列非離子型表面活性劑,以脂肪酶、胃蛋白酶、溶菌酶為對象,運(yùn)用正交試驗(yàn)對包衣過程和條件進(jìn)行了系統(tǒng)地研究,綜合考慮產(chǎn)率和活性等因素得到了優(yōu)化的制備條件.以月

3、桂醇和月桂酸在異辛烷中的酯化反應(yīng)為模型測定了不同包衣脂肪酶的活性.討論了離子種類和離子強(qiáng)度、pH值、有機(jī)溶劑、超聲時(shí)間、表面活性劑種類、表面活性劑與酶的用量比率、冷藏時(shí)間等因素對包衣的影響.詳細(xì)討論了酶的包衣機(jī)理和酶促反應(yīng)活性原理. 其次,通過使用不同的非離子表面活性劑和AOT、CTAB進(jìn)行復(fù)配,運(yùn)用電導(dǎo)法研究了混合反膠束體系的微觀結(jié)構(gòu)和性質(zhì),通過增溶水量等指標(biāo)發(fā)現(xiàn)AOT/Tween80和CTAB,Tween85是較為出色的混合

4、反膠束體系.實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),表面活性劑的總濃度、離子型表面活性劑和非離子表面活性劑的摩爾比及緩沖溶液中鹽的濃度等因素都會對混合反膠束的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)產(chǎn)生影響.本文篩選出較合適的配比使混合反膠束體系的含水量和穩(wěn)定性同時(shí)達(dá)到較大.以橄欖油在異辛烷中水解反應(yīng)為模型研究了增溶酶的混合反膠束體系的性能,發(fā)現(xiàn)非離子表面活性劑的加入提高了酶活和酶的穩(wěn)定性.原因是非離子表面活性劑分子降低了反膠束離子層的電荷密度,減弱了可導(dǎo)致酶變性的靜電相互作用. 本文最