基于親和素--生物素雙夾心體系測(cè)定外源性蛋白血清動(dòng)態(tài)濃度的非抗體依賴新方法及腫瘤微環(huán)境影響肥大細(xì)胞在腫瘤組織分布的初步研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2011級(jí)碩士學(xué)位論文基于親和素生物素雙夾心體系測(cè)定外源性蛋白血清動(dòng)態(tài)濃度的非抗體依賴新方法及腫瘤微環(huán)境影n向]HE大細(xì)胞在腫瘤組織分布的初步研究Anovelmethodforassessmentofdynamicconcentrationofexogenousproteininserum：anantibodyindependentsandwichsystembasedonavidin—biotininteractionan

2、dTumormicroenvironmentinfluencesthedistributionofmastcellsinthetumortissue課題來源：自選學(xué)位申請(qǐng)人余穎欣導(dǎo)師姓名富寧教授劉艷君副教授專業(yè)名稱免疫學(xué)培養(yǎng)類型學(xué)術(shù)型培養(yǎng)層次碩士研究生所在學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2014年4月30日廣州摘要題研究的目的。生物素(biotin)，分子質(zhì)量約24431u，可偶聯(lián)在許多蛋白質(zhì)多肽大分子上，而不對(duì)其理化性質(zhì)、生物學(xué)活性產(chǎn)生明顯影響。親和素

3、，是特異性結(jié)合生物素的蛋白。一分子親和素可與四分子生物素結(jié)合，兩者間的親和力極強(qiáng)且不可逆。由于上述特點(diǎn)，親和素生物素系統(tǒng)在分子識(shí)別、相互作用、純化、檢測(cè)、固定、標(biāo)記、病毒載體及非放射性藥物靶向系統(tǒng)等研究中發(fā)揮著重要作用。但在多數(shù)情況下是將生物素標(biāo)記抗體或抗原，與相應(yīng)的抗原或抗體反應(yīng)后，以酶或熒光素標(biāo)記親和素作為檢測(cè)信號(hào)。本研究基于雙抗體夾心ELISA的原理，利用親和素一生物素的結(jié)合特點(diǎn)，建立了一種檢測(cè)外源性蛋白質(zhì)／多肽的血清動(dòng)態(tài)濃度的新

4、型方法，即包被親和素一生物素標(biāo)記蛋白一檢測(cè)親和素的雙夾心體系，簡(jiǎn)稱SA雙夾心體系。該方法特異性強(qiáng)、靈敏度高，不依賴抗體或放射性同位素，且使用簡(jiǎn)便和成本廉價(jià)，并成功應(yīng)用于兩種生物素標(biāo)記外源蛋白的小鼠血清動(dòng)態(tài)濃度檢測(cè)中，可望在外源蛋白多肽類大分子及其藥物的體內(nèi)定量檢測(cè)和代謝動(dòng)力學(xué)研究中廣泛應(yīng)用。一、親和素生物素標(biāo)記蛋白，多肽雙夾心體系的建立以鏈親和素為捕獲分子，加入待測(cè)生物素標(biāo)記蛋白或多肽，辣根過氧化物酶標(biāo)記鏈親和素為檢測(cè)分子，構(gòu)建鏈親和素

5、生物素標(biāo)記大分子一酶鏈親和素的雙夾心體系(SA雙夾心體系)，并進(jìn)行特異性、靈敏度、準(zhǔn)確性及穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，SA雙夾心體系的檢測(cè)特異性強(qiáng)，與非生物素化蛋白不存在非特異結(jié)合；靈敏度高，檢測(cè)下限可達(dá)03125ng／ml，且可通過改變親和素的固相包被濃度調(diào)整檢測(cè)的敏感度與檢測(cè)范圍；準(zhǔn)確性高，回收率為9782％10792％；穩(wěn)定性好，批內(nèi)與批間檢測(cè)的變異系數(shù)分別576％和842％。二、親和素生物素雙夾心體系的體內(nèi)應(yīng)用從體外的平行性試驗(yàn)和小鼠