乳酸菌胞外多糖化學(xué)組成的研究.pdf

1、乳酸菌是人體腸道內(nèi)的一大類正常菌群，是公認(rèn)的安全的微生物。嗜熱鏈球菌能夠產(chǎn)生乳酸，屬于乳酸菌，是鏈球菌屬中唯一的益生菌。其產(chǎn)生的異型多糖具有多種生理功能，能夠增強(qiáng)人體免疫，可用于食品工業(yè)和醫(yī)藥等領(lǐng)域，具有潛在的開發(fā)價(jià)值，因而受到人們關(guān)注。但是胞外多糖的產(chǎn)量低，并且胞外多糖的分子量和化學(xué)組成不清楚，這是限制胞外多糖在工業(yè)中應(yīng)用的一個(gè)瓶頸。為了解決這個(gè)問題，人們做了大量的研究工作。在發(fā)酵工業(yè)中，提高微生物代謝產(chǎn)物產(chǎn)量和分析代謝產(chǎn)物的分子量及

2、化學(xué)組成的方法有多種，包括改變菌株的遺傳性狀、優(yōu)化微生物的發(fā)酵條件、優(yōu)化產(chǎn)物的提取條件、凝膠色譜法和三甲基硅烷化法等。
　　本文以嗜熱鏈球菌為材料，MRS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，優(yōu)化了嗜熱鏈球菌胞外多糖的提取工藝條件，對(duì)得到的粗多糖用DEAE-Cellulose離子交換柱進(jìn)行了分離，并且采用SephadexG-100柱層析和氣相色譜對(duì)純化的多糖的分子量和結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步研究。
　　采用酶法、TCA法、sevag法、酶+TCA法、酶

3、+sevag法、TCA+sevag法、酶+TCA+sevag法研究對(duì)嗜熱鏈球菌胞外多糖去蛋白的影響，結(jié)果表明酶+sevag法為最佳去蛋白法。
　　通過單因素試驗(yàn)選取乙醇濃度、多糖溶液pH值、醇沉溫度3因素的水平，采用3因素3水平Box-Behnken統(tǒng)計(jì)學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，進(jìn)行響應(yīng)面回歸分析，以脫蛋白的純多糖為響應(yīng)值，確定了胞外多糖提取工藝中各影響因素的最優(yōu)條件并得到回歸模型。顯著性分析結(jié)果表明:回歸模型較好地反映了胞外多糖提取量與乙

4、醇濃度、多糖溶液pH值、醇沉溫度的關(guān)系;最優(yōu)工藝條件為在乙醇濃度為90％、多糖溶液pH值為6、醇沉溫度為15℃時(shí)，胞外多糖提取量為2.9005g/L?；貧w模型的預(yù)測值與實(shí)測值的相對(duì)誤差在2.4％左右，表明回歸方程與實(shí)際情況擬合較好。
　　對(duì)得到的粗多糖用DEAE-Cellulose離子交換柱和葡聚糖G-100凝膠柱進(jìn)行了分離純化，并用紫外光譜全波長掃描對(duì)得到的多糖的純度進(jìn)行了鑒定，隨后采用Sephadex G-100柱層析對(duì)純多糖

5、的分子量進(jìn)行了研究。結(jié)果表明粗多糖用蒸餾水和0.1mol/LNaCl通過DEAE-Cellulose離子交換柱可以分為中性多糖和酸性多糖，用葡聚糖G-100凝膠柱對(duì)酸性多糖的純度進(jìn)行了鑒定，得到單一的峰，紫外光譜掃描對(duì)酸性多糖進(jìn)行全波長掃描，酸性多糖中不含蛋白質(zhì)和核酸，證明得到的酸性多糖為純多糖，測得純多糖的分子量是3.2X104Da。
　　采用氣相色譜對(duì)純多糖的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步研究。GC圖譜顯示純多糖是雜多糖，至少由葡萄糖、半乳糖