滾環(huán)復制放大技術在腫瘤細胞檢測及分子邏輯門體系中的應用研究.pdf

1、隨著生存環(huán)境的不斷惡化，腫瘤和金屬離子污染已經(jīng)嚴重威脅到人類的健康?；瘜W發(fā)光分析法因其操作方便、靈敏度高、設備簡單等優(yōu)點，受到越來越多科研工作者的廣泛關注。本論文研制了兩種新型適體生物傳感器，分別應用于腫瘤細胞的高靈敏度檢測和微量金屬離子的檢測，本文所建立的方法具有高選擇性、高靈敏度等優(yōu)點，在環(huán)境保護、臨床研究、體外診斷等方面具有十分廣泛的應用前景。本論文主要研究內容如下:
　　一、金屬離子觸發(fā)滾環(huán)復制放火反應以及它在分子邏輯門體

2、系中的應用
　　Hg2+能使錯配的T-T堿基對形成穩(wěn)定的T-Hg2+-T堿基對，Ag+能使錯配的C-C堿基對形成穩(wěn)定的C-Ag+-C堿基對，這些特性為用于金屬離子檢測的分子機器的組裝和邏輯門體系的執(zhí)行提供了一種新型通用的技術平臺。首先，將探DNA與引物DNA雜交，然后，加入Hg2+或Ag+，在連接酶的作朋下將模板DNA連接成環(huán)，然后在DNA聚合酶和dNTPs作用下進行滾環(huán)復制放大反應，用標記有熒光素的分子信標與滾環(huán)復制的產(chǎn)物雜交，

3、連接上大量的信號探針，大大增強了產(chǎn)物的熒光信號，實現(xiàn)了對Hg2+、Ag+金屬離子的高靈敏度檢測，同時，由于Hg2+、Ag+與T-T、C-C堿基對之間的特異性結合，也使得本實驗具有良好的選擇性。
　　二、滾環(huán)復制放大技術在腫瘤細胞檢測中的應用
　　基于生物條形碼納米技術和滾環(huán)復制放大技術，通過細胞適體識別功能，我們提出了一種高靈敏度的檢測Ramos細胞的化學發(fā)光成像方法。首先，把引物和環(huán)狀DNA雜交，然后在Klenow聚合酶和