新型口腔表面麻醉劑的初步研究.pdf

1、目的:
　　利用跨膜肽(TAT)介導(dǎo)的納米高分子脂質(zhì)體作為鹽酸利多卡因的載體，組裝和構(gòu)建新型的口腔表面麻醉劑，通過(guò)離體和在體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究其透皮滲透性能，并應(yīng)用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)初步評(píng)價(jià)藥物的麻醉效果。
　　方法:
　　1、跨膜肽（TAT）納米高分子脂質(zhì)體(PLs)的制備
　　以十八烷基季銨鹽殼聚糖(OQLCS)為原料制備PLs，以紅外光譜法驗(yàn)證合成結(jié)果，采用激光粒度儀、透射電鏡等通過(guò)粒徑、表面電位等表征手段優(yōu)化其制備參數(shù);

2、然后對(duì)OQLCS進(jìn)行TAT組裝、驗(yàn)證，進(jìn)一步制備TAT-PLs，為合成新型納米口腔表面麻醉劑奠定基礎(chǔ)。
　　2、載藥跨膜肽納米高分子脂質(zhì)體的制備
　　將局麻藥鹽酸利多卡因(LID)包覆進(jìn)入PLs，以載藥PLs的藥物包封率為主要篩選指標(biāo)，優(yōu)化新型納米口腔表面麻醉劑的制劑配方，應(yīng)用粒徑、Zeta電位等指標(biāo)對(duì)該表面麻醉劑進(jìn)行表征，研究體外藥物釋放規(guī)律和儲(chǔ)藏穩(wěn)定性。
　　3、研究載LID跨膜肽納米高分子脂質(zhì)體（LID-TAT-

3、PLs）透皮滲透性能
　　藥物滲透量檢測(cè):應(yīng)用Franz擴(kuò)散池和高效液相色譜分析法(HPLC)，研究LID-TAT-PLs對(duì)離體去毛小鼠皮膚的滲透性，并比較與LID傳統(tǒng)脂質(zhì)體(CLs)和LID注射液滲透性的差異?？梢暬瘽B透深度檢測(cè):在活體去毛小鼠皮膚表面應(yīng)用熒光標(biāo)記的TAT-PLs，處死后冰凍切片在激光共聚焦顯微鏡(CLSM)下觀察，研究藥物滲透深度及到達(dá)的層次，以驗(yàn)證該新型納米表面麻醉劑透皮的高效性。
　　4、LID-TA

4、T-PLs初步藥效學(xué)研究
　　兔角膜刺激實(shí)驗(yàn)研究LID-TAT-PLs對(duì)無(wú)髓鞘神經(jīng)末梢的麻醉效果;蟾蜍坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位實(shí)驗(yàn)研究LID-TAT-PLs的麻醉效力，評(píng)價(jià)對(duì)髓鞘、神經(jīng)周膜的穿透能力;小鼠熱板實(shí)驗(yàn)研究LID-TAT-PLs經(jīng)皮膚滲透后的鎮(zhèn)痛麻醉效果。綜合評(píng)價(jià)LID-TAT-PLs的藥理效應(yīng)。
　　結(jié)果:
　　1、用OQLCS與膽固醇為原料，以薄膜法、反相蒸發(fā)法制備的PLs，粒徑分別為223.8nm和66.7nm

5、，Zete電位分別為6.94mV和8.03mV;TAT-OQLCS與膽固醇制備TAT-PLs，粒徑73.69nm，Zeta電位8.42mV，均為層層包裹結(jié)構(gòu)。
　　2、建立了紫外分光光度-葡聚糖凝膠層析測(cè)定脂質(zhì)體LID包封率的方法。LID-PLs和LID-TAT-PLs，隨脂質(zhì)含量提高，藥物包封率增加，體系的粘稠度也增加，當(dāng)藥脂比為1∶3后再增加脂質(zhì)的量，包封率反而下降。當(dāng)藥∶脂=1∶3時(shí)，LID包封率約為80％，且多分散指數(shù)PI

6、＜0.3，粒徑在150nm左右，Zeta電位為50～60mV。體外釋放情況為前20min有突釋，持續(xù)釋放大約3h;在4℃密封環(huán)境下儲(chǔ)存90d，比傳統(tǒng)脂質(zhì)體粒徑變化小、團(tuán)聚少，藥物泄漏率低。
　　3、建立了分析LID-TAT-PLs透皮實(shí)驗(yàn)，接受液中LID含量的HPLC分析方法。6h離體小鼠Franz透皮實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，LID的滲透量:LID-TAT-PLs＞LID-PLs＞LID-CLs＞LID，LID-TAT-PLs的透皮滲透量為

7、LID注射液的4.85倍，LID-CLs的1.75倍，LID-PLs的1.16倍?；铙w小鼠皮膚給藥3h后，CLSM觀察皮膚縱切片熒光的滲透亮度與深度順序?yàn)?TAT-PLs＞PLs＞CLs＞游離的熒光劑。
　　4、藥效學(xué)初步評(píng)價(jià):①兔角膜刺激實(shí)驗(yàn):LID-PLs和LID-TAT-PLs與LID注射液和LID-CLs相比，兔角膜反射消失時(shí)間沒(méi)有差異(P＞0.05)，而麻醉持續(xù)時(shí)間比注射液延長(zhǎng)約10min(P＜0.05)。②蟾蜍坐骨神經(jīng)

8、動(dòng)作電位實(shí)驗(yàn):與LID注射液和LID-CLs相比，LID-PLs和LID-TAT-PLs對(duì)蟾蜍坐骨神經(jīng)動(dòng)作電位AP幅度抑制更明顯(P＜0.05)。LID-TAT-PLs在10min時(shí)，AP幅度在各組中最低(P＜0.05)。③小鼠熱板實(shí)驗(yàn):注射液無(wú)效，而LID-PLs和LID-TAT-PLs組痛閾上升快且幅度大(P＜0.05)，LID-TAT-PLs組在20min痛閾值達(dá)到最高，接近60s測(cè)量極限。
　　結(jié)論:
　　1、以TA

9、T-OQLCS與膽固醇為原料(2∶1/w∶w)，采用反相蒸發(fā)法成功制備納米高分子脂質(zhì)體，為層層包裹結(jié)構(gòu)，粒徑小，Zeta電位為陽(yáng)性。
　　2、以藥脂比為1∶3的最優(yōu)配方制備新型口腔表面麻醉劑，此時(shí)藥物的包封率、PI值、粒徑和Zeta電位均符合口腔表面給藥條件，體外釋放規(guī)律與口腔局部麻醉要求基本符合，在4℃密封環(huán)境下儲(chǔ)存的穩(wěn)定性高。
　　3、該新型表面麻醉劑體內(nèi)和體外的透皮滲透速度和滲透量都超過(guò)傳統(tǒng)脂質(zhì)體和注射液，能有效提高L