高效液相色譜法測(cè)定血清總膽固醇參考方法的復(fù)現(xiàn)和血脂測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化的探討.pdf

1、目的：
　　血清總膽固醇(TC)是常規(guī)實(shí)驗(yàn)室重要的測(cè)定項(xiàng)目，在高脂血癥的診斷和心血管病的防治中都具有重要的意義。血清總膽固醇的測(cè)定是測(cè)定血中存在的脂蛋白形式的游離膽固醇和膽固醇酯。常規(guī)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行總膽固醇的測(cè)定多數(shù)采用酶法測(cè)定，其方法簡(jiǎn)單、快速、方便，適合在生化分析儀上進(jìn)行大批量測(cè)定。但是常規(guī)實(shí)驗(yàn)室所使用的儀器、試劑、校準(zhǔn)品呈現(xiàn)多樣化，為了使常規(guī)實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的結(jié)果準(zhǔn)確、一致，就需要用參考測(cè)量系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)其測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化。從北京協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)

2、科2008年到2010年的衛(wèi)生部室間質(zhì)評(píng)結(jié)果和CAP室間質(zhì)評(píng)結(jié)果去回溯，不同的室間質(zhì)評(píng)因?yàn)榛|(zhì)效應(yīng)的存在和分組的差異對(duì)結(jié)果的解讀也有差異。參考方法由于程序繁瑣，成本昂貴不適用于大規(guī)模的比對(duì)。
　　本研究用超高效液相色譜復(fù)現(xiàn)了高效液相色譜測(cè)定膽固醇的候選參考方法，初步嘗試了用復(fù)現(xiàn)的超高效液相色譜參考方法去賦值單一來源的新鮮冰凍血清，并嘗試將其用于14個(gè)常規(guī)系統(tǒng)的校準(zhǔn)。探討了用這種模式去提高多系統(tǒng)血脂測(cè)定一致性的可能性。
　　方

3、法：
　　以乙醇作為溶劑，準(zhǔn)確配制膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，用豆甾醇作為內(nèi)標(biāo)物，經(jīng)過衍生化及提取等前處理，復(fù)現(xiàn)了高效液相色譜色譜測(cè)定膽固醇的方法，并對(duì)復(fù)現(xiàn)后方法進(jìn)行了完善的方法學(xué)評(píng)價(jià)。留取同一來源的志愿者血清，用本研究復(fù)現(xiàn)的參考方法進(jìn)行賦值，并驗(yàn)證其均質(zhì)性和穩(wěn)定性。進(jìn)行了5個(gè)系統(tǒng)和14個(gè)系統(tǒng)的兩次比對(duì)，比對(duì)采用常規(guī)校準(zhǔn)品校準(zhǔn)和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)兩種模式進(jìn)行測(cè)試不同濃度的54份新鮮混合血清。對(duì)結(jié)果進(jìn)行參比系統(tǒng)的相關(guān)和偏差分析，并分析在醫(yī)學(xué)決定水平處

4、的偏差和對(duì)每個(gè)樣本兩種校準(zhǔn)方式下的變異。
　　結(jié)果：
　　本研究復(fù)現(xiàn)的高效液相色譜參考方法測(cè)定總膽固醇，其與NIST SRM的偏倚為0.75％;批內(nèi)精密度均小于1.0％，批間精密度均小于3.0％。賦值新鮮冰凍血清用常規(guī)酶法檢測(cè)CV均小于1.0％;90天內(nèi)穩(wěn)定性良好，賦值結(jié)果為4.56mmol/L，參考方法測(cè)試的不精密度為0.65％。
　　兩次比對(duì)各系統(tǒng)的不精密度均能滿足要求，第一次比對(duì)中TC除了C系統(tǒng)1水平CV超過了N

5、CEP的標(biāo)準(zhǔn)(＜3.0％)，其他系統(tǒng)精密度均可接受;TG各系統(tǒng)均滿足NCEP的標(biāo)準(zhǔn)(＜5.0％);第二次比對(duì)的精密度均滿足NECP的標(biāo)準(zhǔn)。
　　第一次比對(duì)中TC、TG測(cè)定中各系統(tǒng)測(cè)定值和相應(yīng)校準(zhǔn)方式下測(cè)定組均值做相關(guān)，r2均在0.95～1.00之間;第二次比對(duì)中TC測(cè)定C系統(tǒng)在常規(guī)校準(zhǔn)和標(biāo)物校準(zhǔn)后與參考方法相關(guān)性較差;E系統(tǒng)在常規(guī)校準(zhǔn)的時(shí)候與參考方法相比相關(guān)性較差，標(biāo)物校準(zhǔn)后相關(guān)性較好。TG的測(cè)定，以A(P)作為參比系統(tǒng)，C系統(tǒng)兩

6、種校準(zhǔn)方式相關(guān)性較差;H系統(tǒng)常規(guī)校準(zhǔn)相關(guān)性較差，標(biāo)物校準(zhǔn)后相關(guān)性較好。
　　第一次比對(duì)中，TC測(cè)定中常規(guī)校準(zhǔn)下醫(yī)學(xué)絕對(duì)水平偏差超過NCEP標(biāo)準(zhǔn)(＜3.0％)有4水平，標(biāo)物校準(zhǔn)下醫(yī)學(xué)絕對(duì)水平偏差超過NCEP標(biāo)準(zhǔn)(＜3.0％)有0水平;TG測(cè)定中常規(guī)校準(zhǔn)下醫(yī)學(xué)絕對(duì)水平偏差超過NCEP標(biāo)準(zhǔn)(＜7.5％)有2水平，標(biāo)物校準(zhǔn)下醫(yī)學(xué)絕對(duì)水平偏差超過NCEP標(biāo)準(zhǔn)(＜7.5％)有1水平。第二次比對(duì)中，TC測(cè)定中常規(guī)校準(zhǔn)下醫(yī)學(xué)絕對(duì)水平偏差超過NCE

7、P標(biāo)準(zhǔn)(＜3.0％)有15水平，標(biāo)物校準(zhǔn)下醫(yī)學(xué)絕對(duì)水平偏差超過NCEP標(biāo)準(zhǔn)(＜3.0％)有4水平;TG測(cè)定中常規(guī)校準(zhǔn)下醫(yī)學(xué)絕對(duì)水平偏差超過NCEP標(biāo)準(zhǔn)(＜7.5％)有15水平，標(biāo)物校準(zhǔn)下醫(yī)學(xué)絕對(duì)水平偏差超過NCEP標(biāo)準(zhǔn)(＜7.5％)有12水平。
　　對(duì)兩種校準(zhǔn)方式下各系統(tǒng)間的變異比較，第一次比對(duì)中TC常規(guī)檢測(cè)系統(tǒng)間結(jié)果的變異為2.19～23.43％，標(biāo)物校準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果的變異為1.35～5.05％;TG常規(guī)檢測(cè)結(jié)果的變異為3.76～2

8、3.65％，標(biāo)物校準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果的變異為0.66～18.43％。第二次比對(duì)中，TC常規(guī)檢測(cè)結(jié)果的變異為4.79～13.83％，標(biāo)物校準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果的變異為2.94～7.60％;TG常規(guī)檢測(cè)結(jié)果的變異為5.44～24.67％，標(biāo)物校準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果的變異為2.92～14.00％。在溯源鏈比較高的賦值血清用于統(tǒng)一校準(zhǔn)后，各系統(tǒng)結(jié)果間的差異顯著變小。
　　結(jié)論：
　　本研究復(fù)現(xiàn)的高效液相色譜測(cè)定TC的參考方法準(zhǔn)確度和精密度均達(dá)到要求，使用其進(jìn)行