白藜蘆醇聚合物膠束的研制.pdf

1、目的：白藜蘆醇（resveratrol，Res）是一種非黃酮類的多酚羥基化合物，普遍分布于葡萄、花生、買麻藤、松樹、虎杖、朝鮮槐等70多種植物中。白藜蘆醇為無色針狀晶體，在水中溶解度極低，但易溶于極性有機(jī)溶劑（如甲醇、乙醇、乙醚、四氯化碳等）。其具有抗菌、抗癌、抗血小板凝聚、保護(hù)心血管和雌激素樣作用等保健功能，已經(jīng)在醫(yī)藥、功能性食品中有所應(yīng)用。由于白藜蘆醇具有難溶于水、半衰期短、代謝和消除速率快、生物利用度低、穩(wěn)定性差等特性，大大的限制

2、了其臨床應(yīng)用。本研究根據(jù)白藜蘆醇的疏水特性，制成聚合物膠束，旨在提高白藜蘆醇的水溶性、穩(wěn)定性并使其具有靶向作用。
　　方法：⑴白藜蘆醇聚合物膠束的制備：難溶性藥物白藜蘆醇的磷脂/脫氧膽酸鈉/PVP三元膠束（PC/BS/PVP-MMS）的制備：采用薄膜分散法，通過單因素考察確定制備條件，并通過藥物與磷脂質(zhì)量比(A)、PVP用量(B)、磷脂與去氧膽酸鈉摩爾質(zhì)量比(C)3個(gè)因素不同水平對(duì)制備工藝的影響進(jìn)行L9(34)正交表研究，以增溶倍

3、數(shù)和包封率為標(biāo)準(zhǔn)篩選并確定最佳處方。按照最佳處方的比例稱取各成分置于圓底燒瓶中，加入一定量的有機(jī)溶劑，進(jìn)行超聲溶解，通過減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除其中的有機(jī)溶劑，加入適量的生理鹽水，勻速振搖水化脫膜，用0.2μm微孔濾膜過濾即可得白藜蘆醇PBPM三元膠束；Res/mPEG-PLA聚合物膠束的制備：稱取嵌段共聚物與Res溶于適量有機(jī)溶劑中，緩慢逐滴加入快速攪拌的蒸餾水中。室溫下攪拌揮發(fā)除盡有機(jī)溶劑，得到澄清透明微帶淡藍(lán)色乳光的溶液，經(jīng)0.45μm濾

4、膜過濾除去不溶性微粒，收集濾液，即為Res/mPEG-PLA膠束溶液。⑵白藜蘆醇聚合物膠束的鑒定方法：采用透射電鏡和粒徑檢測(cè)方法對(duì)白藜蘆醇聚合物膠束的形成進(jìn)行驗(yàn)證。⑶白藜蘆醇聚合物膠束的質(zhì)量研究：建立了HPLC法測(cè)定白藜蘆醇聚合物膠束中的含藥量，并進(jìn)行方法學(xué)考察。以粒徑、含藥量、包封率為指標(biāo)進(jìn)行影響因素試驗(yàn)和加速試驗(yàn)，以考察其穩(wěn)定性情況。⑷白藜蘆醇膠束的體外溶血性研究：取大鼠血制備紅細(xì)胞混懸液，按照處方量制備白藜蘆醇膠束。取多支試管，在

5、不同濃度的膠束中加入紅細(xì)胞混懸液，混勻后觀察并用分光光度法測(cè)定各組 A值，以此評(píng)價(jià)膠束溶血性。⑸藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)：以SD大鼠為受試動(dòng)物，采用灌胃和尾靜脈兩種給藥方式。采用HPLC法測(cè)定灌胃和尾靜脈注射白藜蘆醇聚合物膠束后大鼠血液中藥物的濃度，對(duì)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)以及相對(duì)生物利用度進(jìn)行研究。⑹細(xì)胞試驗(yàn)：將人乳腺癌細(xì)胞MCF-7進(jìn)行傳代和培養(yǎng)后，設(shè)置空白對(duì)照組、溶酶組以及Res和Res-MP膠束組，通過抑制率來評(píng)價(jià)對(duì)MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。⑺小鼠體

6、內(nèi)抗腫瘤作用的研究：30只S180小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、生理鹽水組(陰性對(duì)照組)、環(huán)磷酰胺組(陽性對(duì)照組)及mPEG-PLA聚合物膠束組。
　　結(jié)果：①根據(jù)單因素考察結(jié)果，選取注射用大豆磷脂、脫氧膽酸鈉、PVPK30進(jìn)行處方研究。通過L9(34)正交表研究，以增溶倍數(shù)和包封率為標(biāo)準(zhǔn)篩選并確定最佳處方：RES:磷脂:膽鹽:PVP=0.025:0.15:0.225:0.05。②根據(jù)處方考察結(jié)果，以共聚物mPEG1900-PLA800

7、0為載體，丙酮為溶劑，丙酮與水相的體積比為1:4，藥載比為35％制備白藜蘆醇嵌段共聚物膠束。③采用透射電鏡和粒徑檢測(cè)方法對(duì)白藜蘆醇聚合物膠束進(jìn)行驗(yàn)證。透射電鏡結(jié)果顯示，形成的聚合物膠束，外觀圓整，大小均一，粒徑在118nm左右。采用馬爾文粒度儀檢測(cè)粒徑，結(jié)果顯示粒徑在118—123nm，符合聚合物膠束的要求。表明白藜蘆醇聚合物膠束制備成功。④建立了HPLC法測(cè)定白藜蘆醇藥物含量的方法?？疾斓慕Y(jié)果顯示，在10μg/mL～200μg/mL范

8、圍內(nèi)的白藜蘆醇濃度和峰面積具有良好的線性關(guān)系，回收率、穩(wěn)定性以及精密度均符合方法學(xué)的要求。白藜蘆醇聚合物膠束的穩(wěn)定性試驗(yàn)表明，在40℃高溫條件下，其外觀變?yōu)榘咨珳啙幔浜恳灿忻黠@的變化。在光照條件下，雖然其外觀無明顯變化，但含量變化很明顯，原因?yàn)榘邹继J醇在光照的條件下會(huì)發(fā)生順反異構(gòu)和降解反應(yīng)，故需要避光操作和保存。⑤白藜蘆醇膠束的體外溶血性研究：綜合觀察法和分光光度法結(jié)果，顯示在實(shí)驗(yàn)濃度下PBPM組產(chǎn)生溶血作用，而Res-MP組溶血率

9、小于5%無溶血現(xiàn)象。⑥藥動(dòng)學(xué)試驗(yàn)：白藜蘆醇聚合物膠束的血管外給藥和尾靜脈注射采用梯形法進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，大鼠灌胃與尾靜脈注射Res-MP膠束相比，Tmax和MRT有所延長(zhǎng)，而且峰濃度Cmax和AUC有所升高。⑦細(xì)胞試驗(yàn)：Res-MP在1-1000μmol/L濃度范圍內(nèi)對(duì)MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)具有抑制作用，抑制作用隨藥物濃度的增加和時(shí)間的延長(zhǎng)明顯增強(qiáng)。⑧小鼠體內(nèi)抗腫瘤作用的研究：Res-PM聚合物膠束組有較強(qiáng)抗腫瘤作用，Res-PM聚合物膠束組