鳥槍法脂質(zhì)組學(xué)分析磷脂和膽固醇酯及其應(yīng)用.pdf

1、本文主要分為三個部分。第一部分利用基于鳥槍法的脂質(zhì)組學(xué)研究策略,分別建立了直接進(jìn)樣電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法分析磷脂和流動注射電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法分析膽固醇酯的方法,并應(yīng)用這兩種方法分析了一些生物樣本中磷脂和膽固醇酯的分子種和含量;第二部分利用直接進(jìn)樣電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法分析了草魚在不同溫度儲藏過程中,肌肉組織的磷脂分子種和含量的變化過程;第三部分利用鳥槍法脂質(zhì)組學(xué)研究策略,觀察口灌恩諾沙星后鯽魚肝臟膜脂的變化,考察恩諾沙星對鯽魚肝臟膜脂代謝所產(chǎn)生的影響

2、。
　　 首先,本文建立了直接進(jìn)樣電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜測定磷脂和流動注射電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜測定膽固醇酯的方法。采用流動注射泵直接進(jìn)樣或液相泵流動注射的方式將樣品導(dǎo)入電噴霧離子源,利用三重四級桿質(zhì)譜的母離子掃描或中性丟失掃描功能,通過掃描磷脂和膽固醇酯的特征性子離子或中性質(zhì)量丟失實(shí)現(xiàn)對六類磷脂(磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油和磷脂酸)和膽固醇酯的定性和定量。方法學(xué)評價(jià)顯示,在一定的濃度范圍內(nèi),磷脂和膽固醇酯的

3、濃度與其經(jīng)電噴霧電離后形成準(zhǔn)分子離子的響應(yīng)值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,且回收率和精密度較好。鳥槍法脂質(zhì)組學(xué)研究策略具有前處理簡單,特異性強(qiáng),分析速度快,定性定量快速準(zhǔn)確且方法穩(wěn)定等特點(diǎn),適合生物樣品中磷脂和膽固醇酯的分析。
　　 其次,應(yīng)用鳥槍法脂質(zhì)組學(xué)研究策略分析了一些生物樣本中磷脂和膽固醇酯的分子種和含量。一方面,應(yīng)用直接進(jìn)樣電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測定了2種淡水魚(草魚和鯽魚)和3種海水魚(帶魚、鯧魚和老虎魚)肌肉組織中磷脂的分子種及含

4、量。結(jié)果表明,淡水魚中溶血性磷脂和多烯磷脂的含量小于海水魚,且海水魚中具ARA、EPA和DHA的多烯磷脂含量較高。這些多烯磷脂比大豆多烯磷脂具有更高的生物活性和營養(yǎng)價(jià)值,有很大的應(yīng)用潛力。另一方面,應(yīng)用流動注射電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞蛋黃和青蟹黃中膽固醇酯的分子種及含量。結(jié)果表明,雞蛋黃中膽固醇酯分子種主要是偶數(shù)碳原子個數(shù)的脂肪酸膽固醇酯,而青蟹黃中還存在一些奇數(shù)碳原子個數(shù)的膽固醇酯分子種;雞蛋黃中飽和脂肪酸膽固醇酯和多不飽和脂肪酸膽固醇

5、酯的含量均低于青蟹黃,而單不飽和脂肪酸膽固醇酯含量高于青蟹黃;雞蛋黃中多不飽和脂肪酸膽固醇酯主要為CE18:2,而青蟹黃中主要為CE22:6、CE20:5和CE20:4。
　　 其后,應(yīng)用直接進(jìn)樣電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法研究了草魚在+20℃,+4℃和-20℃溫度下分別儲藏72 h,3 d和90 d過程中肌肉組織的磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和磷脂酰絲氨酸分子種和含量的變化。結(jié)果顯示,在+20℃儲藏72 h和+4℃儲藏7 d過程中

6、,磷脂組分基本呈先逐漸上升,再緩慢減少的趨勢。溶血性磷脂的變化趨勢與磷脂的變化趨勢基本上一致,但略有不同。在+20℃儲藏條件下,磷脂的劣變要遠(yuǎn)遠(yuǎn)快于+4℃儲藏條件下。在+20℃和+4℃儲藏過程中,一些低豐度的PE分子種,如PE16:0/16:1、PE16:1/18:1和PE16:0/18:1等的含量逐漸上升。這些特殊的PE由魚肉腐敗過程中微生物產(chǎn)生,其含量有望成為評價(jià)魚肉品質(zhì)的一個新指標(biāo)。在-20℃儲藏90 d的過程中,草魚肌肉組織中磷

7、脂和溶血性磷脂含量變化不明顯,表明磷脂和溶血性磷脂在低溫儲藏過程中能夠保持長時間的穩(wěn)定。
　　 最后,采用基于鳥槍法的脂質(zhì)組學(xué)研究策略,研究口灌恩諾沙星后鯽魚肝臟膜脂(磷脂和膽固醇酯)的變化過程,考察恩諾沙星對鯽魚肝臟膜脂代謝的影響。結(jié)果顯示,低濃度的恩諾沙星對鯽魚肝臟細(xì)胞膜脂的組成和含量均會產(chǎn)生較大的影響,主要表現(xiàn)在磷脂含量的降低,溶血性磷脂和膽固醇酯含量的上升。隨著恩諾沙星逐漸代謝轉(zhuǎn)化,膜脂逐漸恢復(fù)正常。本研究結(jié)果表明,低劑