硒的存在形式和生物利用率及其對(duì)磷脂和膽固醇酯代謝的影響.pdf

1、本文以硒為研究對(duì)象，分析了其在南美白對(duì)蝦蛋白和多糖中的分布情況以及硒在小鼠體內(nèi)的生物利用率和對(duì)腸磷脂和膽固醇酯代謝的影響。全文主要分為兩個(gè)部分，第一部分建立微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法(MD-ICP-MS)分析元素硒，通過(guò)提取南美白對(duì)蝦中各類(lèi)蛋白和多糖，確定硒的分布情況;第二部分建立了小鼠模型，通過(guò)飼喂不同濃度的硒，確定其生物利用率以及對(duì)腸磷脂和膽固醇酯代謝的影響。
　　 第一部分，首先建立了MD-ICP-MS分析微量元素硒

2、的方法，優(yōu)化了前處理?xiàng)l件和儀器參數(shù)。結(jié)果表明，該方法樣品制備快速簡(jiǎn)單，在0.2～20μg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r=0.9999)，檢出限低，靈敏度高，且精密度(RSD＜1.84％)和回收率(87.16％～90.18％)均符合分析要求;經(jīng)測(cè)定南美白對(duì)蝦中硒的含量為0.225±0.015mg/kg(n=3)。然后采用順序提取法，依次提取南美白對(duì)蝦中水溶性蛋白、鹽溶性蛋白、醇溶性蛋白和堿溶性蛋白，但未提到醇溶性蛋白，其它三種蛋白含量的相

3、對(duì)百分比依次為堿溶性蛋白(63.17％)＞水溶性蛋白(23.79％)＞鹽溶性蛋白(13.04％);應(yīng)用已建立的MD-ICP-MS法測(cè)定三種蛋白中的硒含量，結(jié)果顯示堿溶性蛋白（1.320mg/kg）＞鹽溶性蛋白（1.283mg/kg）＞水溶性蛋白（1.052mg/kg），結(jié)合各蛋白提取物的提取率，可知蛋白硒占總硒的66.67％，可見(jiàn)硒在南美白對(duì)蝦中主要以與蛋白結(jié)合的形式存在;同時(shí)，提取南美白對(duì)蝦中的多糖，多糖最佳提取條件為料液比(w/v)

4、1∶25，提取溫度70℃，提取時(shí)間5h，提取次數(shù)1次，最終測(cè)得多糖的提取率為75.67％;文中比較了Sevag法、木瓜蛋白酶-Sevag法和胰蛋白酶-Sevag法脫蛋白的優(yōu)劣，綜合考慮蛋白質(zhì)去除率和多糖損失率，選擇胰蛋白酶酶解，Sevag法反復(fù)脫蛋白4次的工藝流程。應(yīng)用已建立的MD-ICP-MS法測(cè)定提取的脫蛋白多糖中硒的含量為0.911±0.014mg/kg（n=3），多糖硒占總硒的5.89％。
　　 第二部分，首先建立小鼠模

5、型，飼喂不同濃度的來(lái)自南美白對(duì)蝦的硒，通過(guò)測(cè)定小鼠各器官及糞便中硒含量變化及肝臟和血液中硒依賴谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPX)活性變化，確定硒在小鼠體內(nèi)的生物利用率。結(jié)果表明，分別補(bǔ)充2、8、16μg/kg小鼠體重的含硒蝦的實(shí)驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ相比于飼喂普通飼料的對(duì)照組，小鼠各器官中硒含量有不同程度的增加。在肝臟和腎臟樣品中，相比于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組Ⅰ硒含量增加不顯著;實(shí)驗(yàn)組Ⅱ表現(xiàn)出顯著性差異(P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組Ⅲ則表現(xiàn)出極顯著性差異(P＜0.

6、01);血液樣品中，實(shí)驗(yàn)組Ⅰ和Ⅱ中的硒含量沒(méi)有顯著性增加，實(shí)驗(yàn)組Ⅲ則表現(xiàn)出顯著性差異(P＜0.05);脾臟樣品中，實(shí)驗(yàn)組Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ均表現(xiàn)出顯著性差異(P＜0.01)。通過(guò)測(cè)定小鼠器官中硒保留量和隨糞便排出的硒含量得到四個(gè)小組中硒的吸收率分別為87.6％、87.9％、85.7％和85.6％。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GPX)活性能夠反映硒被機(jī)體利用的情況，結(jié)果顯示，肝臟樣品中小鼠GPX活性隨著硒濃度的增加而增加，其中實(shí)驗(yàn)組Ⅱ和Ⅲ相比于對(duì)照組都表

7、現(xiàn)出顯著性差異(P＜0.05);而在血液樣品中，這個(gè)差異更加明顯，均表現(xiàn)出極顯著性差異(P＜0.01)。結(jié)果表明來(lái)自南美白對(duì)蝦中的硒在小鼠體內(nèi)具有較高的生物利用率;隨后，應(yīng)用已建立的小鼠模型，研究硒對(duì)小鼠腸中磷脂和膽固醇酯代謝的影響:采用電噴霧離子源，利用三重四極桿質(zhì)譜的母離子掃描或中性丟失掃描功能，通過(guò)掃描磷脂和膽固醇酯的特征性子離子或中性質(zhì)量丟失實(shí)現(xiàn)對(duì)三類(lèi)磷脂（磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰絲氨酸）和膽固醇酯的定性和定量。結(jié)果表明