天然抗氧化劑對(duì)節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)的魚(yú)體免疫細(xì)胞毒效應(yīng)的保護(hù)作用及機(jī)理研究.pdf

1、節(jié)球藻毒素是泡沫節(jié)球藻的次級(jí)代謝產(chǎn)物，廣泛分布于藍(lán)藻水華爆發(fā)水域，能損害魚(yú)類(lèi)免疫系統(tǒng)，影響?hù)~(yú)類(lèi)正常的生理機(jī)能，對(duì)魚(yú)類(lèi)生存造成危害。本研究選用藻食性鯉科鯽魚(yú)(Carassius auratus)為材料，采用離體細(xì)胞培養(yǎng)體外誘導(dǎo)方法，通過(guò)流式細(xì)胞儀凋亡率測(cè)定、共聚焦激光顯微鏡和透射電鏡細(xì)胞結(jié)構(gòu)觀(guān)察、瓊脂糖凝膠電泳DNA-Ladder檢測(cè)技術(shù)研究節(jié)球藻毒素對(duì)魚(yú)體免疫細(xì)胞的毒效應(yīng)。在此基礎(chǔ)上，深入研究了節(jié)球藻毒素對(duì)鯽魚(yú)淋巴細(xì)胞毒性的分子機(jī)理。<

2、br>　　 共聚焦激光顯微鏡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，空白組細(xì)胞核質(zhì)呈現(xiàn)出均勻的熒光，節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)組的細(xì)胞則表現(xiàn)為顆粒狀熒光碎片.透射電鏡實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示了節(jié)球藻毒素暴露后的鯽魚(yú)淋巴細(xì)胞呈現(xiàn)的典型細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)特征，處理組細(xì)胞漿內(nèi)空泡增多，細(xì)胞胞質(zhì)濃縮，胞核染色質(zhì)發(fā)生凝集等現(xiàn)象，對(duì)照組細(xì)胞則表現(xiàn)為細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，核染色質(zhì)分布均勻.瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果均顯示，節(jié)球藻毒素可誘導(dǎo)細(xì)胞DNA片段化，分別出現(xiàn)典型的細(xì)胞凋亡特征DNA-Ladd

3、er和亞二倍體峰;1、5、10、100μg/L節(jié)球藻毒素處理12h后，淋巴細(xì)胞凋亡率分別達(dá)到15.76％、17.36％、20.34％、44.21％，而對(duì)照組的僅為2.4％.結(jié)果表明，節(jié)球藻毒素可以誘導(dǎo)鯽魚(yú)淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡.
　　 研究還發(fā)現(xiàn)，節(jié)球藻毒素可以提高細(xì)胞內(nèi)ROS水平，降低線(xiàn)粒體膜電位，上調(diào)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，下調(diào)Bcl-2基因mRNA表達(dá)量，上調(diào)Bax的基因mRNA表達(dá)量，降低Bcl-2蛋白表達(dá)量，上調(diào)Bax蛋白表達(dá)量，

4、激活Caspase3和Caspase9活性，Caspase8表達(dá)則無(wú)差異.可見(jiàn)，節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)鯽魚(yú)淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡主要表現(xiàn)為線(xiàn)粒體通路，進(jìn)而可能影響?hù)~(yú)類(lèi)免疫系統(tǒng)。
　　 天然抗氧化劑表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)是一類(lèi)天然抗氧化劑，具有清除氧自由基、抑制細(xì)胞凋亡、增強(qiáng)細(xì)胞免疫力等功能。節(jié)球藻毒素可以誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激，產(chǎn)生細(xì)胞毒性，本研究從抗氧化系統(tǒng)和細(xì)胞凋亡兩方面研究了10、100、1000μg/L EGCG對(duì)100μ

5、g/L節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)組鯽魚(yú)淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用，探討其對(duì)節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)魚(yú)類(lèi)細(xì)胞毒性的解毒作用機(jī)理。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，EGCG可以降低節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)的魚(yú)體免疫細(xì)胞氧化損傷，提高胞內(nèi)SOD和CAT酶活性，增加胞內(nèi)GSH含量，降低胞內(nèi)ROS水平，減少細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化損傷.流式結(jié)果表明，10、100、1000μg/L EGCG添加處理12h后，細(xì)胞凋亡率分別降低為27.9％、19.1％、13.7％，而100μg/L節(jié)球藻毒素誘導(dǎo)組的細(xì)胞