乳酸菌表面蛋白鑒定及其細(xì)菌延伸因子EF-Tu的免疫生物學(xué)特性研究.pdf

1、乳酸菌是廣泛存在于自然環(huán)境中，種類繁多，作為益生菌廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥以及畜牧業(yè)等領(lǐng)域。乳酸菌是近些年來，對(duì)預(yù)防和治療胃腸道疾病、調(diào)節(jié)微生物菌群在胃腸道內(nèi)平衡，提高機(jī)體免疫力起到了重要作用。然而乳酸菌在發(fā)揮益生作用時(shí)，通過與宿主發(fā)生粘附而定植，從而抑制致病菌的粘附。粘附是乳酸菌發(fā)揮益生作用的第一步，而粘附的主要物質(zhì)是乳酸菌的表面蛋白，本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)乳酸菌的表面蛋白進(jìn)行提取與鑒定，以及延伸因子EF-Tu的免疫生物學(xué)特性進(jìn)行研究。研究?jī)?nèi)容如下

2、:
　　(1)對(duì)不同菌株的乳酸菌的疏水性和自凝聚能力進(jìn)行測(cè)定，戊糖片球菌F28-8的疏水性、自凝聚能力最強(qiáng)，植物乳桿菌HP12的疏水性、自凝聚能力最弱。同一方法提取不同疏水性的乳酸菌表面蛋白，提取表面蛋白的效率不同。結(jié)果顯示，戊糖片球菌F28-8提取其表面蛋白效率卻是最低的。相反，植物乳桿菌HP12提取其表面蛋白的效率最高。
　　(2)采用3種方法提取乳酸菌表面蛋白，用1 mg/mL溶菌酶結(jié)合1 mol/L LiCl方法提取

3、乳酸菌的表面蛋白效果最好。用1 mg/mL溶菌酶結(jié)合1 mol/L LiCl提取表面蛋白的量是另外兩種方法的3倍以上。電鏡結(jié)果顯示，戊糖片球菌H13用1 mg/mL溶菌酶結(jié)合1mol/L LiCl處理后，表面蛋白明顯溶出，表明1 mg/mL溶菌酶結(jié)合1 mol/L LiCl提取表面蛋白效率最高。
　　(3)戊糖片球菌H13表面蛋白的鑒定結(jié)果顯示，表面蛋白中大多數(shù)的蛋白為中間代謝產(chǎn)物和運(yùn)輸?shù)鞍祝谕幌鄬?duì)分子質(zhì)量條帶有多種蛋白存在。

4、但延伸因子EF-Tu所在條帶蛋白種類最少，相同位置的植物乳桿菌條帶鑒定只有延伸因子EF-Tu，且具有高度免疫原性，由此可以作為乳酸菌菌株分離的蛋白靶標(biāo)。
　　(4)通過延伸因子EF-Tu抗血清檢測(cè)乳酸菌的菌體和其他的非乳酸菌的菌體和裂解物進(jìn)行交叉反應(yīng)，大腸桿菌、沙門氏菌以及弧菌的菌體與裂解物對(duì)延伸因子EF-Tu抗血清都不呈現(xiàn)陽性反應(yīng)，而戊糖片球裂解物以及植物乳桿菌、棒狀乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌的菌體和裂解物呈現(xiàn)