口服透明質(zhì)酸對(duì)實(shí)驗(yàn)性小鼠骨關(guān)節(jié)炎的作用及其藥物動(dòng)力學(xué)的初步探討.pdf

1、目的：
　　 骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)發(fā)病率高，防治難，是世界范圍內(nèi)的重要公共衛(wèi)生問(wèn)題。透明質(zhì)酸（Hyaluronic acid，HA）是構(gòu)成軟骨基質(zhì)和維持關(guān)節(jié)功能的重要物質(zhì)。
　　 本文結(jié)合國(guó)內(nèi)外最新研究，就口服透明質(zhì)酸對(duì)OA中的防治及其吸收形式進(jìn)行了以下四個(gè)方面的實(shí)驗(yàn)：
　　 （1）建立冷水誘導(dǎo)的小鼠OA 模型；
　　 （2）觀(guān)察口服HA對(duì)冷水刺激下小鼠發(fā)生OA的預(yù)防作用；

2、>　　 （3）觀(guān)察口服HA對(duì)OA小鼠的治療作用；
　　 （4）初步探討HA在OA小鼠中的藥物動(dòng)力學(xué)。
　　 方法：
　　 針對(duì)以上四個(gè)方面的研究，研究方法如下：
　　 （1）選用清潔級(jí)BALB/C小鼠20只適應(yīng)性飼養(yǎng)5d后隨機(jī)分為空白組和模型組，每組各10只。給予模型組小鼠右膝關(guān)節(jié)6℃～8℃冷水刺激,觀(guān)察體重變化情況。30d后用游標(biāo)卡尺測(cè)量關(guān)節(jié)直徑，用ELISA 法測(cè)定小鼠血清腫瘤壞死因子（TNF-a）

3、、類(lèi)風(fēng)濕因子（IgM）及透明質(zhì)酸（HA）的含量，并取膝關(guān)節(jié)行HE 染色制作病理切片。
　　 （2）將50只BALB/C小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、低、中、高劑量HA 干預(yù)組，按上述方法建立小鼠OA 模型的同時(shí)，從預(yù)防角度給予口服不同劑量的透明質(zhì)酸，采用膝關(guān)節(jié)腫脹度、血清學(xué)指標(biāo)及病理學(xué)切片評(píng)價(jià)口服透明質(zhì)酸從預(yù)防角度干預(yù)OA的作用效果。
　　 （3）將48只BALB/C小鼠稱(chēng)重后隨機(jī)分為空白組、模型組、低、中、高劑量HA 干

4、預(yù)組和陽(yáng)性藥物組，按上述冷水刺激方法建立小鼠OA 模型后，給予口服不同劑量的透明質(zhì)酸和陽(yáng)性藥物，采用膝關(guān)節(jié)腫脹度、血清學(xué)指標(biāo)及病理學(xué)切片評(píng)價(jià)口服透明質(zhì)酸干預(yù)后的治療效果。
　　 （4）將90只BALB/C小鼠稱(chēng)重后，隨機(jī)分為NS對(duì)照組和HA 處理組兩組，按上述實(shí)驗(yàn)方每天給予冷水刺激，建立實(shí)驗(yàn)性小鼠OA 模型。刺激結(jié)束后次日，分別給予OA小鼠口服0.9％NS，HA。在給藥后0、0.5、1、1.5、2、4、8、12、24h時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)

5、各取5只，處死后測(cè)量血清HA水平，探討HA 口服后的藥物動(dòng)力學(xué)。
　　 結(jié)果：
　　 （1）模型組小鼠與空白組小鼠相比，右膝關(guān)節(jié)直徑差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；
　　 血清TNF-a和HA水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），血清IgM的水平無(wú)變化（P＞0.05）。模型組膝關(guān)節(jié)切片出現(xiàn)軟骨及滑膜細(xì)胞排列紊亂，核溶或消失，有明顯軟骨及滑膜細(xì)胞增生、鈣化、粘連，及關(guān)節(jié)腔間隙變窄等骨關(guān)節(jié)炎病理改變。

6、　　 （2）從預(yù)防角度干預(yù)OA小鼠模型后，實(shí)驗(yàn)周期結(jié)束時(shí)，各干預(yù)組小鼠骨關(guān)節(jié)紅腫程度減輕(P<0.01)，血清中TNF-а、HA、MDA、T-SOD水平均低于模型組(P<0.05)，以中、高劑量HA組效果較好，中、高劑量干預(yù)組病理切片仍有骨關(guān)節(jié)炎病理改變，但病理改變程度輕于模型組。
　　 （3）經(jīng)治療后，各干預(yù)組小鼠骨關(guān)節(jié)紅腫程度減輕(P<0.01)，血清中TNF-а、HA、MDA、T-SOD水平均低于模型組(P<0.05)，

7、以中、高劑量HA組效果較好，治療組病理切片出現(xiàn)軟骨及滑膜細(xì)胞分布密度改變，細(xì)胞紊亂，及增生、變性粘連等骨關(guān)節(jié)炎病理特點(diǎn)，但與模型組相比病理改變差異尚不明顯。
　　 （4）實(shí)驗(yàn)性O(shè)A小鼠口服HA后，在1.5h 左右處出現(xiàn)吸收峰，8h 左右處出現(xiàn)合成峰，AUC0-24h為1027ug·h/L；NS對(duì)照組血清HA 曲線(xiàn)變化無(wú)規(guī)律性，未出現(xiàn)吸收峰。
　　 結(jié)論：
　　 （1）冷水刺激可誘發(fā)小鼠骨關(guān)節(jié)炎，小鼠骨關(guān)節(jié)炎模型建