表面改性PLGA納米粒子的制備及其作為基因載體的研究.pdf

1、目前基因治療面臨最大挑戰(zhàn)是如何將外源治療基因高效靶向運(yùn)輸?shù)侥繕?biāo)組織，因此構(gòu)建具有較高基因轉(zhuǎn)運(yùn)能力同時(shí)具有較低生物毒性和生物相容性的基因載體成為目前研究重點(diǎn)。
　　 本課題首先用PEI和十六烷基溴化物合成兩親性聚合物PEI-cetyl，采用復(fù)乳化溶劑揮發(fā)法構(gòu)建了PLGA為核PEI為殼的PLGA/cetyl-PEI納米粒子(PCPNPs)，以此為基礎(chǔ)構(gòu)建基因載體。為了增強(qiáng)納米粒子對腫瘤細(xì)胞靶向作用和降低細(xì)胞毒性，用透明質(zhì)酸(hyal

2、uronic acid HA)對納米粒子表面作修飾，形成PLGA/cetyl-PEI/HA納米復(fù)合物(PCPH NPs)。對制備納米粒子的形貌、粒徑、zeta電位等理化性質(zhì)分析。并對PCPH/pDNA復(fù)合物做作相關(guān)表征，N/P為12時(shí)的PCPH/pDNA復(fù)合物的粒徑為150nm，表面電位為21.3mv;瓊脂糖凝膠電泳顯示PCPH NPs能夠很好的與pDNA形成穩(wěn)定的復(fù)合物，并對pDNA有保護(hù)作用。
　　 在體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染試驗(yàn)中，采

3、用PCPH NPs作為pEGFP的載體轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，通過對比不同轉(zhuǎn)染試劑所表達(dá)的綠色熒光蛋白，證實(shí)PCPH NPs相較PEI、PCP具有高轉(zhuǎn)染效率，并且略優(yōu)于目前最常用的陽離子脂質(zhì)體lipofecatmine2000。采用MTT法對新型納米基因載體在最高效轉(zhuǎn)染效率下的細(xì)胞毒性作評估，結(jié)果顯示Hela細(xì)胞在PCPH最優(yōu)轉(zhuǎn)染條件下的存活率高于90％，證實(shí)PCPH NPs具有極低的細(xì)胞毒性。通過PCPHNPs基因載體抗血清特性研究表明在有

4、血清和無血清的狀態(tài)下PCPH NPs對細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率基本不變，表明其具有抗血清破壞特性，能夠保護(hù)攜帶基因不被降解。因此其可以直接加到細(xì)胞培養(yǎng)基中，轉(zhuǎn)染前后無需更換培養(yǎng)基，簡化轉(zhuǎn)染程序。
　　 我們同時(shí)還考察了PCPH NPs作為穩(wěn)定性較差的小RNA的載體，選取了anti-miR221作為研究對象，探討了納米粒子介導(dǎo)anti-mir-221對HepG2生長的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示納米粒子可以將anti-miR-221轉(zhuǎn)運(yùn)入肝癌細(xì)胞中，并