魚精蛋白包覆的乙肝疫苗PLGA納米粒載體的制備研究.pdf

1、聚乳酸羥基乙酸（PLGA）分子材料具備相對較好的生物可降解性和相容性，已經(jīng)廣泛地在納米載藥系統(tǒng)研究中運(yùn)用。PLGA納米粒作為蛋白質(zhì)疫苗載體的應(yīng)用具有很大潛力，目前已有研究發(fā)現(xiàn)與可溶性抗原相比，顆粒性抗原可能具備更強(qiáng)的誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的能力，并且在納米粒子表面修飾正電荷后，可以更有效地促進(jìn)抗原呈遞細(xì)胞（APC）的攝取。本文利用帶正電荷并富集精氨酸的魚精蛋白（PS）包覆PLGA包裹乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的納米粒表面，考察納米粒對小鼠

2、傳代樹突狀細(xì)胞DC2.4的吞噬效果影響，對小鼠原代骨髓源樹突狀細(xì)胞（BMDC）的表型、細(xì)胞因子分泌的影響，以及對小鼠體內(nèi)免疫的影響。本文開展的主要工作有：
　　（1）復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備PLGA包裹HBsAg納米粒（HBsAg/PLGA）和PS包覆的PLGA包裹HBsAg納米粒（HBsAg/PLGA/PS），并進(jìn)行表征：采用激光粒度儀測定其粒徑（size）、多分散系數(shù)（PDI）、表面電位（Zeta-potential），ELISA測

3、定HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS納米粒的包封率。結(jié)果為HBsAg/PLGA納米粒size為293.4±6.9 nm，PDI為0.109±0.070，Zeta-potential為-21.8±1.6mV，包封率為45.23±6.19％。HBsAg/PLGA/PS納米粒size為330.5±14.1 nm，PDI為0.210±0.019，Zeta-potential為9.6±1.3 mV，包封率為47.27±5.56%，納

4、米粒表面包覆PS后，Zeta-potential由負(fù)電荷轉(zhuǎn)變?yōu)檎姾?。用透射電鏡觀察 HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS納米粒，發(fā)現(xiàn)納米粒為球形并具有典型核-殼結(jié)構(gòu)。此外，考察了HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS納米粒的體外釋放與穩(wěn)定性情況。
　　（2）本文制備了FITC-OVA/PLGA納米粒和FITC-OVA/PLGA/PS納米粒。通過流式細(xì)胞儀考察了FITC-OVA/PLGA、FITC-OVA/P

5、LGA/PS納米粒對DC2.4的攝取效率的影響。結(jié)果表明，PS包覆的納米?？娠@著地促進(jìn)DC2.4對FITC-OVA的攝取。從小鼠骨髓細(xì)胞中分離分化原代BMDC并考察了HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS納米粒對BMDC表面主要組織相容性復(fù)合物I類分子（MHCI）、主要組織相容性復(fù)合物II類分子（MHC II）、CD80、CD83和CD86等BMDC表面分子表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)HBsAg/PLGA納米?？梢燥@著增強(qiáng)MHC II和C

6、D86的表達(dá)，而HBsAg/PLGA/PS納米?？梢燥@著增強(qiáng)MHCI、MHCII、CD83和CD86的BMDC表面分子的表達(dá)?？疾霩BsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS納米粒對BMDC分泌的IL-4、 IL-12p70等細(xì)胞因子的影響，發(fā)現(xiàn)HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS納米粒均可顯著促進(jìn)IL-4、IL-12p70的分泌，其中，HBsAg/PLGA/PS納米粒促進(jìn)IL-12p70分泌能力更強(qiáng)。
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7、本文對HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS納米粒在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫的能力進(jìn)行了評價，HBsAg/PLGA、HBsAg/PLGA/PS納米粒均顯示出一定的誘導(dǎo)血清中IgG反應(yīng)和誘導(dǎo)Th1型細(xì)胞免疫的能力，而以HBsAg/PLGA/PS納米粒誘導(dǎo)能力較強(qiáng)。結(jié)果表明，PS的表面修飾對PLGA納米粒在小鼠體內(nèi)的免疫效果有更強(qiáng)的增強(qiáng)作用。
　　綜上所述，HBsAg/PLGA納米粒和HBsAg/PLGA/PS納米粒作