基于表面修飾的明膠-硅氧烷納米粒子和HBV病毒樣顆粒作為基因載體的研究.pdf

1、本文旨在以明膠-硅氧烷納米粒子(GS NPs)為基礎(chǔ),對(duì)其進(jìn)行表面修飾,并考察其攜帶質(zhì)粒DNA在細(xì)胞和動(dòng)物水平的轉(zhuǎn)染效率。同時(shí),利用變性試劑對(duì)HBV病毒樣核心顆粒在體外條件下進(jìn)行解離與重組,考察其作為基因載體的潛力。本文工作主要分為以下三個(gè)方面:
　　 1.適配體AGRO100能夠靶向識(shí)別A549細(xì)胞,引入聚乙二醇(PEG)作為橋聯(lián)劑連接明膠.硅氧烷納米粒子與適配體AGRO100,并延長(zhǎng)了納米粒子在動(dòng)物體內(nèi)的血液循環(huán)時(shí)間。同時(shí)進(jìn)

2、一步在納米粒子表面連接有助于納米粒子在細(xì)胞內(nèi)逃逸溶酶體的多肽HA2。通過(guò)納米粒子修飾前后粒徑和表面電位的變化,證實(shí)了聚乙二醇(PEG)、適配體和HA2成功連接到納米粒子表面。通過(guò)靜電力吸附將DNA與GS NPs進(jìn)行復(fù)合,然后進(jìn)行上述的表面修飾,并通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳證實(shí)該納米粒子能夠有效載負(fù)質(zhì)粒DNA。
　　 2.通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)對(duì)明膠.硅氧烷納米粒子(GS NPs)、聚乙二醇和適配體修飾的明膠.硅氧烷納米粒子(GS-PEG-Apt

3、 NPs)和聚乙二醇、適配體和多肽HA2修飾的明膠-硅氧烷納米粒子(GS-PEG/HA2-Apt NPs)的細(xì)胞生物相容性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。通過(guò)激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀證實(shí)GS NPs,GS-PEG-Apt NPs和GS-PEG/HA2-Apt NPs均能夠進(jìn)入A549細(xì)胞,但是GS-PEG-Apt NPs和GS-PEG/HA2-Apt NPs進(jìn)入更多量,大約為GS NPs的兩倍。同時(shí),通過(guò)活體成像技術(shù)觀測(cè)發(fā)現(xiàn):功能化的納米粒子攜帶質(zhì)粒D

4、NA能夠有效靶向到裸鼠的腫瘤部位,并能夠在腫瘤部位實(shí)現(xiàn)熒光素酶質(zhì)粒PGL3的有效表達(dá)。
　　 3.利用變性試劑尿素(Urea)、鹽酸胍(GdnHC1)或含EGTA和DTT的其他變性試劑來(lái)考察HBV病毒樣核心顆粒在體外解離與重組的性質(zhì)。透射電鏡(TEM)觀測(cè)顯示,HBV病毒樣顆粒在合適濃度的變性試劑作用下能夠?qū)崿F(xiàn)解離,且在移除變性試劑后均能很好地實(shí)現(xiàn)病毒樣顆粒的重組,且HBV病毒樣核心顆粒和多肽Tat修飾的HBV病毒樣核心顆粒進(jìn)入