基于硅氧烷的基因載體的制備及體內(nèi)基因轉(zhuǎn)染的研究.pdf

1、本文旨在以硅氧烷納米材料作為基礎(chǔ)，引入陽離子聚合物，制備有機(jī)-無機(jī)雜化納米基因載體。本文工作主要分為以下三個(gè)方面： 1.以羧甲基殼聚糖、有機(jī)硅烷(GPSM)作為反應(yīng)物，以氨水作為反應(yīng)介質(zhì)，在水相中制得羧甲基殼聚糖-硅氧烷(CMG)納米顆粒。采用電子透射顯微鏡及粒徑儀對(duì)CMG納米顆粒的形貌、尺寸和表面電位進(jìn)行表征。通過紅外光譜、熱失重分析等方法，對(duì)CMG納米顆粒的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析，并探討了該基因載體的合成機(jī)制。為了提高該載體的功能性

2、及結(jié)合DNA的能力，通過共價(jià)鍵連的方法將具有逃逸溶酶體功能的KALA活性多肽修飾到CMG納米顆粒表面(CMG-KALA)。通過激光共聚焦、熒光光譜以及紅外光譜證明KALA可以成功地連接到CMG納米顆粒表面；通過靜電引力吸附將DNA與CMG-KALA納米顆粒進(jìn)行復(fù)合，并通過瓊脂糖凝膠電泳證明該納米顆粒對(duì)DNA具有很好的保護(hù)作用。因此CMG-KALA納米顆粒具有作為基因載體應(yīng)用到體外轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的潛力。 2.在本課題組前期工作的基礎(chǔ)上，

3、為了賦予明膠硅氧烷(GS)納米顆粒更多的功能性，分別制備了具有穿膜作用、逃逸溶酶體作用以及核定位作用的多肽修飾的GS納米顆粒，并通過靜電吸附的方法將DNA與GS-peptide納米顆粒進(jìn)行復(fù)合。通過熒光光譜確定了納米顆粒上不同多肽的連接率；通過粒徑儀分析GS-peptide納米顆粒的粒徑及表面電位，并通過DNAstar分析軟件對(duì)不同多肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了模擬，確定了其發(fā)生螺旋及兩親性的氨基酸序列；通過激光共聚焦顯微鏡和瓊脂糖凝膠電泳確定G