納米羥基磷灰石基因載體的表面修飾及其轉(zhuǎn)染研究.pdf

1、納米羥基磷灰石(HAP)作為基因載體有很多優(yōu)良的特性,但是目前對納米羥基磷灰石基因載體的應(yīng)用還存在很多阻礙,目前關(guān)鍵的問題是提高納米羥基磷灰石的分散穩(wěn)定性及其攜帶基因、轉(zhuǎn)染基因的能力。本實驗分別采用聚乙烯亞胺(PEI)、六偏磷酸鈉、牛血清蛋白、人血白蛋白作為分散劑,采用超聲分散和機械攪拌法制備HAP膠體,并利用紫外分光光度計、紅外光譜儀、納米粒度及Zeta電位儀、電子顯微鏡等手段檢測膠體性能,并研究了PEI修飾的不同形貌HAP的生物相容

2、性、細胞毒性和基因轉(zhuǎn)染效率的實驗。得到以下主要結(jié)論:
　　 對HAP/PEI分散體系進行分析發(fā)現(xiàn)當PEI濃度為4‰時,體系具有較好的穩(wěn)定性;適度的酸性環(huán)境有利于體系的穩(wěn)定性。測試分析表明:PEI在HAP顆粒表面有吸附,PEI的正電荷和高分子鏈使得HAP顆粒因靜電斥力與空間位阻共同作用而分散;TEM下觀察發(fā)現(xiàn)改性后的納米羥基磷灰石分散性得到明顯改善。
　　 六偏磷酸鈉對體系的分散穩(wěn)定性有較好的效果。實驗分析發(fā)現(xiàn):當六偏磷酸

3、鈉的濃度為4％、pH為9.5時效果最好;吸附在顆粒表面的六偏磷酸鈉為HAP顆粒提供了很高的電位,使得顆粒之間以靜電斥力而分散;TEM分析結(jié)果顯示改性后的納米羥基磷灰石分散性顯著提高。
　　 HAP/牛血清蛋白分散體系的檢測發(fā)現(xiàn):中性環(huán)境中,牛血清蛋白濃度為2.0mg/ml時分散體系的穩(wěn)定性相對較好;電位與粒度測試說明牛血清蛋白對納米羥基磷灰石膠體穩(wěn)定性的改善是靜電斥力與空間位阻共同作用;TEM分析結(jié)果表明表面吸附牛血清蛋白的納米

4、羥基磷灰石顆粒分散性得到一定增強。人血白蛋白與牛血清蛋白有較為相似的結(jié)果:人血白蛋白濃度為2.0mg/ml、pH=7.4時分散體系的穩(wěn)定性最好;Zeta電位與粒度分析闡述了人血白蛋白濃度和體系pH值對HAP顆粒的影響趨勢,紅外光譜也顯示納米羥基磷灰石被人血白蛋白吸附修飾,TEM顯示出了HAP顆粒較好的分散狀態(tài)。
　　 經(jīng)過PEI修飾后各種形貌的HAP均能高效地負載DNA,環(huán)境酸堿性的變化亦不會降低HAP對DNA的吸附性。在保護試