不同羥基磷灰石納米顆?；蜉d體性能的比較研究.pdf

1、目的：為尋找更為安全、高效的非病毒型基因載體，對(duì)10種新改良的羥基磷灰石(Hydroxyapatite，HAT)納米顆粒的體外基因載體性能進(jìn)行評(píng)估。 方法：用透射電鏡觀察了納米顆粒的形態(tài)，并在室溫下觀察其懸浮穩(wěn)定性；測(cè)定了經(jīng)過(guò)改良的10種HAT納米顆粒在不同pH值和不同的HAT納米顆粒濃度環(huán)境下的DNA結(jié)合和保護(hù)能力、體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染能力和對(duì)Hela細(xì)胞的生物相容性；并探討了用于HAT納米載體滅菌的方法。 結(jié)果：10種納米載

2、體經(jīng)制備工藝改良后在廣泛的pH值范圍內(nèi)與DNA具有良好的結(jié)合能力；經(jīng)過(guò)非病毒型基因載體聚乙烯亞胺(Polyethylenimine，PEI)等表面活性劑處理的HAT納米載體與DNA具有更好的結(jié)合能力；而未經(jīng)PEI等表面活性劑處理的HAT顆粒的懸浮穩(wěn)定性較差，導(dǎo)致其在低濃度時(shí)與DNA的結(jié)合能力較弱。細(xì)胞克隆集落實(shí)驗(yàn)證實(shí)10種改良的HAT納米顆粒在轉(zhuǎn)染濃度范圍內(nèi)未見明顯的毒性改變；而經(jīng)過(guò)PEI表面修飾及分散劑處理的HAT顆粒在濃度高于150

3、0μg/ml時(shí)表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒性。第8種HAT納米載體轉(zhuǎn)染效率最高，在入宮頸癌上皮細(xì)胞(簡(jiǎn)稱Hela細(xì)胞)中的轉(zhuǎn)染效率約為20％，在人鼻咽癌上皮細(xì)胞(簡(jiǎn)稱CNE-1細(xì)胞)中的轉(zhuǎn)染效率約為35％。對(duì)照組脂質(zhì)體在Hela細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率約70％，在CNE-1細(xì)胞中轉(zhuǎn)染效率約為85％。透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，高溫滅菌法對(duì)HAT納米顆粒無(wú)粒徑膨脹影響。 結(jié)論：10種改良的HAT納米載體在廣泛pH范圍內(nèi)與DNA的結(jié)合能力強(qiáng)，在轉(zhuǎn)染濃度范圍內(nèi)與H