脂質(zhì)納米粒的制備及基因轉(zhuǎn)染研究.pdf

1、脂質(zhì)納米粒(LN)主要包括固體脂質(zhì)納米粒(SLN)和納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(NLC)，是近年來研究十分活躍的靶向緩控釋膠粒給藥系統(tǒng)之一。本研究以乙醇為有機(jī)相溶劑、泊洛沙姆188為表面活性劑，并用單硬脂酸甘油酯(MS)和硬脂胺(ODA)為脂質(zhì)材料，通過水性溶劑擴(kuò)散法制備陽離子固體脂質(zhì)納米粒，在單硬脂酸甘油酯中加入液態(tài)的油酸(OA)或者聚乙二醇單硬脂酸酯(PEG2000-SA)，制備OA-NLC或者PEG-SLN。制備得到的SLN粒徑在100 n

2、m以下，加入OA或者PEG后，其粒徑變化不大。將脂質(zhì)納米粒與HEK293細(xì)胞共孵育，結(jié)果表明，SLN的攝取情況較好，th后就有明顯的細(xì)胞攝取，脂質(zhì)納米粒配方中加入OA或者PEG后，細(xì)胞攝取增加。
　　 本文將適宜比例的魚精蛋白/DNA二元復(fù)合物與SLN或者NLC復(fù)合，制備三元納米粒，用于基因轉(zhuǎn)染。SLN/魚精蛋白/DNA三元轉(zhuǎn)染系統(tǒng)中，當(dāng)SLN和DNA的質(zhì)量比從16:3增加到80:3時(shí)，三元納米粒的粒徑從188.50±0.26

3、nm增加到259.33±3.44 nm，電位從25.50±3.30 mV增加到33.40±2.80 mV。在含血清的培養(yǎng)條件下，當(dāng)三元納米粒中的固體脂質(zhì)納米粒(ODA質(zhì)量比為15％的固體脂質(zhì)納米粒)和DNA的質(zhì)量比達(dá)到50:3的時(shí)候，三元納米粒的轉(zhuǎn)染效率最高(26.13±5.22％)；當(dāng)SLN和DNA的質(zhì)量比高于50:3，或者SLN中ODA的含量超過20％后，可能由于三元復(fù)合物的毒性增強(qiáng)，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率降低。與脂質(zhì)體lipofectanu

4、neTM2000比較，三元納米粒的基因表達(dá)更為持續(xù)，而且在有血清存在的條件下表達(dá)更穩(wěn)定。采用含有不同OA和PEG比例的OA-NLC或者PEG-SLN，制備三元復(fù)合物納米粒基因轉(zhuǎn)染系統(tǒng)。形成的三元納米粒粒徑均在200 nm左右，表面電位都為負(fù)值。在含血清的環(huán)境中，當(dāng)OA-NLC/魚精蛋白/DNA三元納米粒中的NLC(油酸質(zhì)量比為20％的NLC)和DNA的質(zhì)量比達(dá)到65:3的時(shí)候，轉(zhuǎn)染效率最高(蟲熒光素酶基因表達(dá)量為(2.27±0.32)*

5、106 RLU/mg蛋白)，這可能與該比例下納米粒的細(xì)胞攝取較多有關(guān)，而相同條件下脂質(zhì)體蟲熒光素酶基因表達(dá)量為(3.63±0.50)*10s RLU/mg蛋白.和脂質(zhì)體lipofectamineTM2000/DNA二元復(fù)合物相比較，三元納米粒能夠在血清環(huán)境中更為持續(xù)地進(jìn)行表達(dá)，而且其細(xì)胞毒性很小，HEK293細(xì)胞半致死濃度均在300±g/mL。SLN用PEG修飾后，HEK293細(xì)胞攝取增加。且隨著處方中PEG量的增加，攝取增加，細(xì)胞轉(zhuǎn)染