煙草根際促生細菌的篩選鑒定及發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化.pdf

1、從湖南官地坪和瀏陽煙科所煙田各采集5個煙草根際土壤樣品。分別采用脫脂奶粉培養(yǎng)基和幾丁質(zhì)培養(yǎng)基，系列稀釋涂布平板法篩選蛋白酶產(chǎn)生菌和幾丁質(zhì)酶產(chǎn)生菌;采用氨化細菌培養(yǎng)基，石蕊試劑變色法篩選氨化細菌。經(jīng)反復(fù)純化驗證，共得到在脫脂奶粉培養(yǎng)基上能夠穩(wěn)定產(chǎn)生透明圈的細菌25株;得到在幾丁質(zhì)培養(yǎng)基上能夠產(chǎn)生穩(wěn)定透明圈的細菌5株;得到氨化細菌6株。對上述菌株進行了16S rRNA鑒定，得到鑒定結(jié)果為PR1同溫層芽孢桿菌(Bacillus stratos

2、phericus)、PR2熒光假單胞菌（Pseudomonasfluorescens）、PR3高地芽孢桿菌（B.altitudinis）、PR4嗜線蟲沙雷氏菌（Serratianematodiphila）、PR5副溶血性弧菌（Hbrio patahaemolyticus）、PR10同溫層芽孢桿菌（B.stratosphericus）、HYC1粘質(zhì)沙雷氏菌（S.marcescens）、HYC2氣單胞菌屬(Aeromonas)、HYC3嗜線

3、蟲沙雷氏菌(S.nematodiphila)、HYC4熒光假單胞菌（P.fluorescens）、HYC5甲基營養(yǎng)芽孢桿菌（B.methylotrophicus）、
　　HN1假單胞菌(Pseudomonas)、HN2嗜線蟲沙雷氏菌(S.nematodiphila)、HN3深紅沙雷氏菌（S.rubidaea）、HN4甲基營養(yǎng)芽孢桿菌（B.methylotrophicus）、HN5解淀粉芽孢桿菌（B.vallismortis）、HN

4、6同溫層芽孢桿菌（B.str atosphericus）。
　　進一步測定了上述菌株的解磷、解鉀以及產(chǎn)生植物激素能力。以上菌株各項功能綜合分析結(jié)果表明，同溫層芽孢桿菌（B.stratosphericus）PR1、同溫層芽孢桿菌（B.stratosphericus）PR10、陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae) JP6、陰溝腸桿菌(E.cloacae)JP9、沙福芽孢桿菌（B.safensis）JX9具有較好的植物

5、促生潛力。
　　對具有促生潛力的PR1、PR10、JP6、JP9、JX9菌株進行了培養(yǎng)基的優(yōu)化。以豆芽汁培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，通過單因素試驗確定各菌株的適合碳源、氮源、無機鹽種類。單因素試驗中所用碳源為玉米粉、可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖;有機氮源為豆餅粉、蛋白胨、酵母膏;無機氮源為尿素、(NH4)2SO4、NH4NO3、NH4Cl;無機鹽為K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、CaCO3。然后通過正交試驗得到每株菌的最

6、優(yōu)培養(yǎng)基。得到PR1的最優(yōu)培養(yǎng)基為:1.5％蔗糖、0.5％玉米粉、2.5％豆餅粉、0.3％尿素、0.3％K2HPO4。PR10的最優(yōu)培養(yǎng)基為:2％葡萄糖、3％豆餅粉、0.3％ NH4NO3、0.3％ MgSO4。JP6的最優(yōu)培養(yǎng)基為:1.5％葡萄糖、2％豆餅粉、0.5％ NH4Cl、0.5％ CaCO3。JP9的最優(yōu)培養(yǎng)基為:1.5％葡萄糖、3％豆餅粉、0.1％ NH4Cl、0.1％ CaCO3。JX9的最優(yōu)培養(yǎng)基為:1.5％玉米粉、3

7、％豆餅粉、0.5％ NH4Cl、0.5％ CaCO3。
　　用優(yōu)化的培養(yǎng)基培養(yǎng)48h后，通過菌落計數(shù)試驗得到PR1菌落數(shù)由3.02×108CFU/g增加至8.86×109CFU/g; PR10菌落數(shù)由1.11×108CFU/g增加至1.83×108CFU/g; JP6菌落數(shù)由5.92×108CFU/g增加至7.55×109CFU/g;JP9菌落數(shù)由4.85×108CFU/g增加至7.58×109CFU/g; JX9菌落數(shù)由3.09