量子點生物傳感膜快速同步定量檢測腫瘤標志物的研究.pdf

1、惡性腫瘤是目前乃至未來病死率較高的病種之一，據(jù)世界衛(wèi)生組織發(fā)布的《2014世界癌癥報告》顯示，2012年全球有820萬人死于癌癥。對腫瘤標志物的檢測有利于實現(xiàn)癌癥的早期診斷，從而提高治療效率，降低死亡率。腫瘤標志物的檢測方法多種多樣，以免疫層析法最為受到關注。免疫層析技術因其簡便、經(jīng)濟、低樣品量、無需專業(yè)人員操作、可實現(xiàn)床旁快速檢測等特點而迅速發(fā)展。但以膠體金為代表的免疫層析試紙條靈敏度不高，進行多組分分析時需要多個檢測帶，且以定性檢測

2、為主，無法滿足對多種腫瘤標志物的早期同步定量檢測需求。
　　免疫層析法所采用的標記材料對免疫傳感器的性能起決定性的作用。熒光量子點（QDs）具有熒光強度高、光化學穩(wěn)定性好、吸收光譜連續(xù)、發(fā)射光譜窄而對等特性，可實現(xiàn)“一元激發(fā)，多元發(fā)射”。基于QDs的優(yōu)勢，針對目前免疫層析產(chǎn)品的不足，我們提出以多色QDs作熒光標記物，開發(fā)一種基于多色QDs標記的生物傳感膜，以實現(xiàn)對多種腫瘤標志物的快速、同步、定量檢測。
　　本文以1-(3-二

3、甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）和 N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）為偶聯(lián)劑，制備546nm CdSe/ZnS QDs-抗甲胎蛋白單抗（QDs546-anti-AFP McAb）和620nm CdSe/ZnS QDs-抗癌胚抗原單抗(QDs620-anti-CEA McAb)偶聯(lián)物。將兩種偶聯(lián)物按一定比例混合噴涂于結合墊上，鼠源甲胎蛋白單抗（anti-AFP McAb）和鼠源癌胚抗原單抗（anti-CEA McAb）混合物以及

4、羊抗鼠IgG分別包被于硝酸纖維素膜(NC膜)上作為檢測帶（T帶）和質(zhì)控帶（C帶），在此基礎上制作多色QDs生物傳感膜。通過熒光閱讀儀檢測傳感膜上T帶和C帶的熒光強度，計算出T帶和C帶的比值（T/C），對應相應的樣品濃度繪制出標準曲線，即可達到定量檢測的目的。在最優(yōu)實驗條件下，本課題組所開發(fā)的多色QDs生物傳感膜對AFP和CEA的檢測限分別為2 ng∕ml和1 ng∕ml，且無明顯交叉反應，靈敏度、特異性高，樣品恢復率好，批內(nèi)穩(wěn)定性好，批