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1、高速逆流色譜(HSCCC)是一項(xiàng)不需固體載體即可實(shí)現(xiàn)連續(xù)液液分配的技術(shù),廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的制備分離方面。但日前為止,多數(shù)HSCCC儀器分離時(shí)間較長(zhǎng),因此有學(xué)者提出了閃式逆流色譜(flash counter current chromatography,F(xiàn)CCC)概念。在閃式逆流色譜中,流動(dòng)相的流速應(yīng)大于等于螺旋管徑值的平方。FCCC儀器的螺旋管長(zhǎng)度通常小于150 m,分離時(shí)間小于5h,因此該技術(shù)特別適合放大進(jìn)行工廠化分離。
2、本文主要包括三方面的內(nèi)容:①大容量三柱串聯(lián)型高速逆流色譜儀的研制與測(cè)試;②FCCC技術(shù)結(jié)合大孔吸附樹(shù)脂柱層析技術(shù)快速制備EC;③茶粗提物巾微量成分的FCCC富集與分離制備及其結(jié)構(gòu)解析。
首先,研制了大容量三柱串聯(lián)型高速逆流色譜儀樣機(jī)一臺(tái),該樣機(jī)配有兩種不同系列型號(hào)的色譜柱:一種螺旋管的內(nèi)徑為10mm,有效柱容積為12L;另一種螺旋管內(nèi)徑為12 mm,有效拄容積為15L。樣機(jī)穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果理想。對(duì)于石油醚-乙酸乙酯-水系統(tǒng),60
3、0 r/min即可取得滿(mǎn)意的保留率。在保證分離度的前提下,12L柱容積色譜柱的最高流速為150 mL/min,15 L柱容積色譜柱的最高流速為180mL/min。
其次,就該樣機(jī)的實(shí)際分離純化能力進(jìn)行了試驗(yàn),將該樣機(jī)應(yīng)用于FCCC分離純化茶多酚中的ECG。在每次分離中,200 g樣品溶解于1600 mL流動(dòng)相中進(jìn)樣。12L系列色譜柱得到含有35 gECG的水溶液7.5L,15L系列色譜柱得到含有40 g ECG的水溶液9L。隨
4、后,ECG被單寧酶酶解為EC與G,利用大孔樹(shù)脂柱對(duì)ECG酶解液進(jìn)行分離純化,共得到EC單體52 g,純度為99.1%。該樣機(jī)有望應(yīng)用于天然產(chǎn)物的工廠化分離中。
第三,采用TBME-水(1∶1,v/v)系統(tǒng),利用該樣機(jī)對(duì)茶多酚樣品中的微量成分進(jìn)行富集分離,得到Ⅰ-Ⅳ四種組分。組分Ⅰ經(jīng)制備高效液相色譜純化后,得到化合物A、B、C、D、E、F,其中化合物A、B和C為單體成分,經(jīng)質(zhì)譜、1D-NMR與2D-NMR結(jié)構(gòu)鑒定后,確定化合物A
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