ε-多聚賴氨酸高產菌的篩選、鑒定及發(fā)酵研究.pdf

1、ε-多聚賴氨酸（ε-Poly-L-lysine，ε-PL）是目前具有優(yōu)良防腐性能和商業(yè)潛力的天然微生物食品防腐劑，在國內食品行業(yè)中有很大的發(fā)展前景。ε-PL在日本已經實現了年產千噸的工業(yè)化生產，但該技術在國內還屬于實驗室階段，處于探索階段，對其開發(fā)和工業(yè)化生產還屬于空白。因此，對ε-PL的工業(yè)化生產的研究具有非常重要的意義。本文所做主要研究內容如下：
　　（1）本課題是從土壤中通過篩選培養(yǎng)基和ε-PL的一些相關性質進行定性定量檢測

2、，從而篩選出來3株較高產量的ε-PL產生菌。并對其進行生理生化和16S rDNA測序的方法鑒定，確定該3株菌的種屬。再對這3株菌中產量最高的菌株進行誘變及抗性平板篩選，最后通過對其誘變高產菌株進行發(fā)酵研究，最終得到ε-PL產量提高的菌株。
　?。?）對篩選出的3株菌進行生理生化和16S rDNA測序鑒定得出結論：4#可能是Delftia acidovorans，8#可能是stenotrophomonas maltophilias，

3、Y#可能是Streptomyces griseolus。通過對這3株菌進行搖瓶發(fā)酵檢測，知4#、8#和Y#三株菌的ε-PL產量分別達到0.757、0.751、0.808g/L，其中Y#產量最高，也將該菌作為后期實驗研究的對象。
　?。?）對選出的ε-PL高產菌Y#進行了亞硝基胍（NTG）誘變處理，在該誘變處理過程中，通過對其誘變條件的研究得到，NTG誘變終濃度1.5mg/mL，誘變處理60min。其致死率可達到96.25%，處于高

4、突變率區(qū)域，利于快速篩選出目的誘變株。并在該條件下對Y#進行誘變處理，通過產量測定篩選得到ε-PL產量為0.854g/L的誘變菌株K-6，并對其進行4次傳代培養(yǎng)，驗證了其遺傳性狀較為穩(wěn)定。
　?。?）對K-6首先進行搖瓶發(fā)酵條件研究，通過單因素實驗和正交試驗得到了發(fā)酵條件的優(yōu)方案為初始pH值7.0、接種量6%、裝液量20mL/100mL、發(fā)酵溫度30℃。再在該條件下通過響應面法優(yōu)化分析對發(fā)酵培養(yǎng)基進行優(yōu)化分析，得到的最佳發(fā)酵培養(yǎng)基

5、成分是葡萄糖、(NH4)2S04、酵母膏和MgS04·7H20的最佳濃度分別為40.00、12.00、7.00、0.30g/L。并對該發(fā)酵研究的結果進行3次發(fā)酵驗證實驗，得到ε-PL產量為0.889g/L，與預測值0.895g/L非常接近，說明該模型能較好的預測實際發(fā)酵情況。并且通過對發(fā)酵條件和發(fā)酵培養(yǎng)基成分的優(yōu)化研究，最終使ε-PL的產量由Y#的0.808g/L提高到了0.889g/L，使ε-PL的產率提高了10.02%，為進一步選育