靈桿菌脂多糖的發(fā)酵、分離及抑菌活性研究.pdf

1、靈桿菌脂多糖(BP-LPS)，是一種從靈桿菌（亦稱粘質(zhì)沙雷氏菌，Serratia marcescens）中提取的中性脂多糖，存在于靈桿菌細(xì)胞壁，其真空冷凍干燥制品為白色粉末，溶于水，不溶于有機(jī)溶劑。靈桿菌脂多糖的生物活性與細(xì)菌脂多糖的一般生物活性相同，但其無明顯的內(nèi)毒素作用。眾多研究表明，靈桿菌脂多糖具有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、抑感染和升高白細(xì)胞作用，目前已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)上的白細(xì)胞減少癥、急慢性盆腔炎、腫瘤及乙型肝炎等疾病的輔助治療，有實際

2、的醫(yī)藥價值。本文對靈桿菌脂多糖進(jìn)行了分離和活性研究，主要研究結(jié)果如下:
　　 (1)通過單因素試驗及響應(yīng)面分析試驗對影響菌株Serratia marcescensNS-17發(fā)酵的主要因素進(jìn)行了研究，確定了優(yōu)化的培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件:麥芽糖8g/L，蛋白胨16g/L，NaCl1g/L，KC12g/L;培養(yǎng)溫度30℃，pH7.0，接種量4％，250mL搖瓶裝液量50mL，搖床轉(zhuǎn)速200rpm，培養(yǎng)32h，菌體干重達(dá)到4.662g/L

3、，比初始培養(yǎng)條件的菌體干重提高了1.73倍。
　　 (2)研究了傳統(tǒng)提取方法與微波輔助PW提取法對靈桿菌脂多糖提取效果的影響，得出微波輔助PW提取法可以有效的提高靈桿菌脂多糖的提取率。通過微波輔助PW法提取靈桿菌脂多糖的單因素實驗，分別確定了各因素的適宜水平，并采用L9（34）正交試驗，優(yōu)化微波輔助提取BP-LPS的工藝參數(shù)。結(jié)果表明，微波輔助PW法提取靈桿菌脂多糖優(yōu)化工藝條件為:提取固液比1∶30，微波處理3min，功率250

4、W，浸提60min，靈桿菌脂多糖提取量高達(dá)13.413mg/g，相比傳統(tǒng)提取方法提高了1.99倍。
　　 (3)研究了幾種樹脂的脫蛋白效果，得到D301陰離子樹脂較佳。并在此基礎(chǔ)上，考察了影響D301陰離子樹脂靜態(tài)吸附蛋白的主要因素。結(jié)果表明:D301陰離子樹脂最佳的脫蛋白條件為靜態(tài)處理時間2h，粗脂多糖濃度2mg/ml，固液比1∶5。D301陰離子樹脂脫蛋白法與常用的三氯乙酸法、鹽酸法、Sevage法進(jìn)行比較實驗，結(jié)果表明D3

5、01陰離子樹脂法脫蛋白率效果好，脂多糖損失率低，是較為理想的脫蛋白方法。
　　 (4)經(jīng)Sephadex G-100凝膠層析柱純化后，得純化靈桿菌脂多糖。通過紫外分光光譜法與高效液相色譜法對分離的靈桿菌脂多糖進(jìn)行純度分析。結(jié)果表明，樣品基本無蛋白、核酸類雜質(zhì)，組成成分與已報道的靈桿菌脂多糖相近，為進(jìn)一步研究提供實驗依據(jù)。
　　 (5)分離純化的靈桿菌脂多糖對供試菌（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、黑曲霉、酵母菌、