蜈蚣草多糖和黃酮的提取及抑菌活性研究.pdf

1、蜈蚣草是蕨類植物中的一種，全草或根狀莖可入藥，全年可采。用于防治流感、痢疾、風(fēng)濕疼痛、跌打損傷。黃酮是蕨類植物所含化學(xué)成分中較多的一種，有很強(qiáng)的生物活性，在醫(yī)藥、食品添加劑上具有廣泛用途。目前蜈蚣草的研究多局限在環(huán)境治理方面，對(duì)其有效成分的提取、純化及其功能性研究報(bào)道較少。為此，我們深入研究蜈蚣草的有效成分多糖和黃酮的提取工藝、黃酮的純化工藝、多糖及黃酮抑菌活性，為蜈蚣草的全面開發(fā)提供理論支持。
　　 1、采用植物化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)

2、試法，初步推測蜈蚣草中的有效成分，利用顏色反應(yīng)專項(xiàng)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蜈蚣草提取物中可能含有黃酮、黃酮醇、異黃酮類化合物。其紫外吸收光譜特征與異黃酮的譜圖相似，據(jù)此可推測蜈蚣草水提物的黃酮類化合物可能為異黃酮；通過加入位移試劑得到的紫外光譜的對(duì)比分析，可以確定該黃酮母核結(jié)構(gòu)中，4’位和3位上有羥基，且A、B環(huán)均無鄰二酚羥基。
　　 2、采用水提醇沉法提取蜈蚣草多糖，由響應(yīng)面中心組合設(shè)計(jì)得出最佳工藝條件為：提取溫度90℃，提取時(shí)間4h，液料比

3、1:25，蜈蚣草多糖提取率為3.78％。紅外光譜研究發(fā)現(xiàn)蜈蚣草多糖具有一般多糖類物質(zhì)的特征吸收峰，同時(shí)多糖結(jié)構(gòu)中存在吡喃環(huán)。
　　 3、對(duì)霉菌發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的兩種發(fā)酵方式(液體發(fā)酵和固體發(fā)酵)進(jìn)行了研究和比較。結(jié)果表明：固體發(fā)酵產(chǎn)酶量多，在設(shè)備、耗能、生產(chǎn)成本方面比液體發(fā)酵優(yōu)越得多。固體發(fā)酵產(chǎn)酶時(shí)，最佳發(fā)酵菌種為黑曲霉，最佳發(fā)酵條件為：稻草粉與麩皮的質(zhì)量比為6:4，調(diào)節(jié)初始培養(yǎng)基pH4.0，接種量為20％，黑曲霉產(chǎn)纖維素酶的CM

4、C酶活達(dá)到最高為3.47U/ml，F(xiàn)PA酶活為2.34U/ml。
　　 用霉菌發(fā)酵制備的粗酶液輔助提取蜈蚣草黃酮能有效的提高黃酮的提取率，最優(yōu)的工藝條件為：蜈蚣草質(zhì)量與酶液體積比為1:40、提取溫度50℃、提取時(shí)間1h，蜈蚣草黃酮提取率為7.9％，比空白對(duì)照組提高了16.2％。
　　 4、選擇4種大孔吸附樹脂對(duì)蜈蚣草黃酮進(jìn)行吸附和解吸，最優(yōu)吸附劑為D101大孔樹脂：最佳純化工藝參數(shù)為：上樣液pH值為5，上樣流速為1ml/

5、min，洗脫液流速為1ml/min，洗脫液為濃度為60％的乙醇。上樣液濃度為4.02mg/ml，純化后，蜈蚣草黃酮濃度為14.71mg/ml，達(dá)到良好的純化效果。
　　 5、蜈蚣草黃酮對(duì)金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌有較強(qiáng)的抑制作用，但對(duì)大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、黑曲霉、米曲霉、綠色木霉等均無抑制作用；蜈蚣草乙酸乙酯層黃酮對(duì)供試菌的最低抑制濃度為：金黃色葡萄球菌亞種2.443mg/ml；金黃色葡萄球菌4.886mg/ml；副溶血性弧

6、菌4.886mg/ml。正丁醇層黃酮對(duì)供試菌種的MIC為：金黃色葡萄球菌亞種5.064mg/ml；金黃色葡萄球菌10.127mg/ml；水提取黃酮對(duì)金黃色葡萄球菌亞種、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧的MIC均為5.663mg/ml。
　　 正丁醇黃酮和水提取層黃酮的抑菌受pH的影響較小，在酸性條件下抑菌活性較高。金屬離子對(duì)抑菌活性的影響較大，經(jīng)Fe3+處理后的黃酮抑菌活性均降低，水提取黃酮在Ca2+處理后，對(duì)副溶血性弧菌的抑制效果增