茶黃素制備與純化條件的初步研究.pdf

1、本文研究一條以成本較低且多酚含量較高的綠茶粉為原料，利用生物酶法制備TFs并采用大孔吸附脂樹(shù)脂法純化TFs的工藝。工藝流程主要分為多酚氧化酶(PPO)酶源物質(zhì)的篩選：提取梨、蘋(píng)果等七種果蔬中PPO并測(cè)定其活性，選擇活性高的果蔬作為酶源物質(zhì)；不同金屬離子對(duì)PPO活性的影響：測(cè)定不同濃度的金屬離子對(duì)PPO活性的影響，選擇PPO的激活劑；制備TFs的反應(yīng)條件的優(yōu)化選擇：對(duì)TFs的合成條件做單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，選擇最佳條件；純化TFs的條件的

2、優(yōu)化選擇。
　　 ⑴選擇梨、蘋(píng)果、馬鈴薯、茶鮮葉、茄子，甘薯和藕等七種不同的果蔬為酶源物質(zhì)，測(cè)定其PPO活性。通過(guò)對(duì)其活性的比較，篩選活性最高者作為制備茶黃素的最佳酶源。各種酶源物質(zhì)活性依次為：茄子中PPO的酶活為174U；馬鈴薯中PPO的酶活為101.43U；甘薯中PPO的酶活為58U；梨中PPO的酶活為37U；藕中PPO的酶活為32U；蘋(píng)果中PPO的酶活為24.67U；茶鮮葉中PPO的酶活為10U。選擇茄子中PPO作為最佳酶

3、源。
　　 ⑵選擇銅離子、錳離子、鎂離子、鈣離子、鈉離子、鋁離子和鐵離子七種離子作為研究對(duì)象，通過(guò)在粗酶液中加入不同濃度的七種金屬離子，研究七種金屬離子對(duì)茄子PPO活性的影響。研究表明，濃度為3mmol/L的銅離子對(duì)PPO有顯著激活作用，而鈣離子、鈉離子、鋁離子和鐵離子對(duì)PPO則有抑制作用。其中，濃度為5mmol/L的鐵離子是PPO的最佳抑制劑。在此條件下PPO的活性可被抑制96.6％。
　　 ⑶通過(guò)對(duì)合成TFs的不同條

4、件(pH值、溫度、底物濃度，酶添加量和反應(yīng)時(shí)間)的研究，在單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，確定合成TFs的最佳條件。結(jié)果表明，反應(yīng)體系的最佳條件為：pH值為4.5，溫度為25℃，底物濃度為2.5g/L，酶添加量為35ml，反應(yīng)時(shí)間為40分鐘。其中，pH值和底物濃度是反應(yīng)體系中重要的兩個(gè)因素。
　　 ⑷采用大孔吸附樹(shù)脂法對(duì)在最佳條件下制備到得的TFs進(jìn)行純化，通過(guò)對(duì)不同吸附條件(樹(shù)脂型號(hào)、pH值、上樣速度、除雜用洗脫液濃度、洗脫液體