茶黃素酶促氧化合成條件的優(yōu)化.pdf

1、茶黃素(TFs:theaflavins)最早是1957年由Roberts E.A.H發(fā)現(xiàn)，是指紅茶中溶于乙酸乙酯的橙黃色物質(zhì)，是由多酚類及其衍生物氧化聚合而成的一類化合物的總稱。茶黃素與紅茶的品質(zhì)密切相關(guān)，是影響紅茶湯色明亮、有金圈的關(guān)鍵性物質(zhì)。茶黃素不僅是紅茶品質(zhì)的重要指標(biāo)，還是一類具有廣泛開發(fā)應(yīng)用前景的天然活性物質(zhì)，由于其擁有抗氧化、抗腫瘤、消炎抗菌、抗病毒等藥理功能和保健功能，使得茶黃素成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。而茶黃素的傳統(tǒng)制備方法是

2、從紅茶中提取茶黃素，但是因?yàn)榧t茶中茶黃素的含量本就不高，而且還面臨提取難度大、分離不易、產(chǎn)品純度低等難點(diǎn)，造成了茶黃素提取成本高、產(chǎn)能低，嚴(yán)重阻礙了茶黃素作為天然產(chǎn)物及功能性食品的開發(fā)與利用。因此研究以兒茶素作為反應(yīng)底物，通過酶促氧化反應(yīng)合成茶黃素，具有重要的理論意義與實(shí)際意義。
　　 1.單相試驗(yàn)
　　 本試驗(yàn)在前人大量研究的基礎(chǔ)上，研究兒茶素酶促氧化生成茶黃素的優(yōu)化條件。單相反應(yīng)從反應(yīng)的pH值、溫度、底物濃度、酶源濃

3、度等方面來探索兒茶素酶促氧化生成茶黃素的最佳反應(yīng)條件。單因素試驗(yàn)的研究結(jié)果顯示:當(dāng)pH=5.0，溫度為30℃，底物濃度為1.75 g/200mL，酶源濃度為50 g/200mL時，茶黃素的生成量最高。通過優(yōu)化試驗(yàn)，對pH值、溫度、底物濃度和酶源濃度等反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化，篩選出的反應(yīng)最適組合條件為:pH=4.96，溫度為30.53℃，底物濃度為1.78 g/200mL，酶源濃度為50.55 g/200mL，茶黃素純品的轉(zhuǎn)換率可以達(dá)到19.4

4、4％。在最適組合的基礎(chǔ)上選出的最佳反應(yīng)時間為50 min，通氧條件可以明顯提高兒茶素氧化生成茶黃素的轉(zhuǎn)換率，特別是采用冷藏鮮葉時，茶黃素的生成量有顯著提高;對酶進(jìn)行處理也可以提高茶黃素的生成量，當(dāng)反應(yīng)中添加虎杖酶時，茶黃素的生成量也顯著提高。
　　 2.雙相試驗(yàn)
　　 在單相試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，我們發(fā)現(xiàn)在反應(yīng)體系中加入有機(jī)溶劑乙酸乙酯，可以提高茶黃素的轉(zhuǎn)換率。試驗(yàn)結(jié)果顯示當(dāng)緩沖液與乙酸乙酯比例為1∶1(v/v)時，可以得到純度